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三聚体膜锚固埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)负责病毒的附着、融合和进入。对其结构的了解对理解两者都很重要埃博拉病毒进入和发展医疗干预。病毒糖蛋白的晶体结构,特别是那些处于亚稳定预融合低聚物状态的糖蛋白,可能很难实现,因为这类蛋白的高度糖基化柔性本质固有于生产、纯化、结晶和衍射方面的挑战。晶体结构埃博拉病毒GP在其三聚体预融合构象中与来源于1995年Kikwit疫情幸存者的人类抗体复合,现已确定[Lee等。(2008),自然(伦敦),454, 177-182]. 这里描述了用于克服结晶和阶段化过程中的一系列技术障碍的技术、战术和策略。糖蛋白在人类胚胎肾293T细胞中产生,可以快速筛选构建物和毫克数量的蛋白表达。GP与抗体片段(Fab)的复合物促进结晶,并尝试了一系列脱糖策略,包括糖突变体、酶脱糖、昆虫细胞表达和聚糖合成代谢途径抑制剂,以改善弱衍射的糖蛋白晶体。通过确定非复杂Fab的结构,提高了分子替换搜索模型的信噪比。相结合Fab模型相和硒异常信号,然后进行NCS平均密度修正,得到了清晰的可解释电子密度图。通过使用B类-通过使用N-连接聚糖位点作为锚定和二级结构预测构建交替序列,确认了值增强的电子密度图和正确的序列寄存器。

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