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最近,高通量大分子晶体学的需求推动了相位方法、数据收集协议和许多其他技术的不断改进。利用铬X射线辐射进行单波长反常散射(SAS)定相,为利用内部收集的数据进行蛋白质定相开辟了一种新的可能性,并导致了以下几个成功的例子:从头开始只使用硫等弱反常散射体的结构解决方案。为了进一步减少数据收集时间并使SAS阶段化更加稳健,将硒代蛋氨酸衍生蛋白(SeMet蛋白)与Cr结合是很自然的K(K)α辐射利用硒的较大反常散射信号(f“”=2.28秒)与硫相比(f“”=1.14秒). 如本文所述,来自热梭菌使用Se-SAS和Cr测定K(K)α辐射。每个蛋白质分子在148个氨基酸残基中包含8个硒代蛋氨酸残基,在Cr下计算得出的Bijvoet比率约为3.5%K(K)α波长。使用成像板探测器与铬源耦合,采集分辨率为2.2º、冗余度约为9倍的单个数据。在缩放衍射数据可用的9小时内,对蛋白质数据库进行结构求解、精炼和沉积。这里使用的程序适用于许多其他蛋白质,有望成为内部高通量晶体学的常规途径。

支持信息

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可移植文档格式(PDF)文件https://doi.org/10.107/S090744905010644/ea5036sup1.pdf
补充材料

PDB参考:假定的分支酸变位酶,1xho,r1xhosf


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