细胞色素的Phe58b条5参与与血红素和轴向配体His63的堆叠相互作用。为了阐明堆叠相互作用对蛋白质稳定性的贡献，以高分辨率测定了F58Y和F58W突变体的晶体结构。F58Y突变体的结构与野生型蛋白的结构基本相同。然而，Phe58突变为Trp58导致单晶生长困难，导致空间群变化；不对称单元中的六个分子形成两个基团，这两个基团通过非晶体学双轴相关联。利用非晶体学对称性，采用分子替换法确定了F58W的结构。F58W突变产生六条侧链的多重构象，一个连接六个残基中两个残基的肽和血红素的延伸丙酸。F58W突变结构不对称单元中的六个分子根据构象分为两类，其中一个分子具有双重构象。由于Trp58的吲哚环和His63/血红素环之间的夹角增加/减少，堆叠相互作用减弱，这说明F58W的稳定性低于野生型蛋白质。
