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使用以下方法研究了大分子晶体的闪速冷却和退火就地X射线成像、衍射峰线型测量和常规晶体衍射。提出了闪速冷却产生无序的主要机制,并证明了减少这种无序的固定温度退火协议应该比现有协议更加可靠和灵活。闪速冷却的四方溶菌酶晶体降低了衍射分辨率,并拓宽了晶格取向(镶嵌性)和晶格间距的分布。衍射分辨率与晶格间距分布的宽度密切相关。在253和233 K的固定温度下退火,可以持续减少晶格间距的扩展,并将退火时间的分辨率提高到~30 s。X射线图像显示,这种改进是由于形成了特征尺寸大于10µm的有序畴,镶嵌比晶体整体更窄。闪速冷却的溶菌酶三斜晶的含水量比四方晶小,衍射分辨率更高,镶嵌性更小,甚至在退火之前也表现出明显的有序畴结构。研究表明,蛋白质晶格和溶剂的差异热膨胀可能是闪络诱导的无序的主要原因。退火的机制<<273 K可减少这种紊乱。

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