图4

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PAT4选择性地影响mTORC1靶点4E-BP1。携带IPTG诱导的shNT或shPAT4(4.8)(A,C)或shNT的HCT116细胞蛋白质提取物的蛋白质印迹,以及在有和无IPTG的情况下培养的shPAT5(7.1)结构体(B,D)。A类B类,第四阶段敲除降低了电泳前用PNGase F培养细胞裂解物后检测到的PAT4蛋白水平。C类-F类,第四阶段敲除显著降低了4E-BP1最磷酸化γ形式的水平,这既可以通过抗磷酸化Ser65-4E-BP1(p-S65-4E-BPl)抗体观察到,也可以通过pan-4E-BPl抗体观察到上层带(箭头所示;在三个独立实验中分别以直方图E和F中4E-BPI总染色的比例进行量化)。磷酸-S6K(p-T389-S6K1)、磷酸-S6(p-S240/244-S6)、磷酸-Akt(p-S473-Akt)和磷酸-ERK(p-T202/Y204-ERK)水平基本上不受第四阶段击倒。用抗微管蛋白抗体检测印迹作为负荷控制。在三个单独的实验中重现了这些效果*P<0.05**P<0.01。