内啡肽/HD-PTP相互作用可以有效地通过溶酶体传递活化的EGFR
（A和B）在（A）与mCherry质粒和Flag-tagged WT-、L15P-或C753S-Endofin构建物瞬时共转染的Endofin-depleted HeLa细胞中，在EGFR追踪30分钟后（50 ng/mL EGF，37°C），由FRIA测定FITC-标记的EGFR-内吞小泡的平均小泡pH值，或（B）HD-PTP-depleted HeLa细胞与mCherry质粒、WT-或T145K-HD-PTP瞬时共转染（干扰HD-PTP与Endofin的相互作用）构建物。对表达mCherry的细胞进行单细胞FRIA分析（囊泡：n>190，显微镜视野：n>10）。绘制了EGFR追踪30分钟后内化EGFR的水泡pH分布。结果表明，NT、shEndofin、WT-Endofin、L15P-Endofen、C753S-Endofein、shHD-PTP-和T145K-HD-PTP-HeLa细胞中不同峰的平均囊泡pH值和囊泡数量。
（C） BioID屏幕的点图显示与泛素化（Ub）和早期内体（EE）相关的蛋白质与WT-Endofin和C753S-Endofin非常接近。将标记生物素连接酶（BirA*）融合到WT-Endofin和C753S-Endofin的N末端，并用作诱饵。将构建物转染到Flp-In T-REx 293T细胞中。点图中的填充阴影表示平均光谱计数（Avg Spec），点的大小表示所有猎物的相对丰度，外圆颜色表示BFDR值。数据为n≥3个独立实验的平均值±SEM。未配对学生t检验：*p<0.05，*p<0.01，***p<0.001。
