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图1

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内啡肽与ESCRT和EGF受体形成复合物

(A) BioID筛选的点图显示ESCRT蛋白与HD-PTP和Endofin非常接近。将标记生物素连接酶(BirA*)融合到HD-PTP和Endofin的N或C末端,并用作诱饵。将构建物转染到Flp-In T-REx 293T细胞中。点图中的填充阴影表示平均光谱计数(Avg Spec),点的大小表示所有猎物的相对丰度,外圆颜色表示BFDR值。

(B) 与模拟转染细胞相比,对瞬时转染myc-Endofin的293T细胞进行共免疫沉淀(Co-IP)。免疫沉淀Myc-Endofin(Myc抗体),用Western blots检测HD-PTP、ESCRT-0(Hrs和STAM2)和ESCRT-I(Tsg101和UBAP1)的co-IP。加载全细胞裂解液(WCL)以显示蛋白质含量。低暴露(LE)和高暴露(HE)免疫印迹显示了Hrs。数据来自n=3个独立实验。

(C) TurboID屏幕的点图显示了在存在或不存在EGF刺激的情况下(100 ng/mL,15分钟),ESCRT蛋白和其他与内吞作用和EGFR激活密切相关的蛋白。将快速反应的小Turbo生物素连接酶(MT)融合到EGFR的C末端(EGFR-MT),转染到T-REx-HeLa细胞中的Flp-In细胞并用作诱饵。

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