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图6

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NRE上Sp1结合和络合物形成动力学。(A) 西南分析。从未经处理(−)或用NDFβ处理30分钟的P-19细胞制备全细胞提取物。在使用NDF治疗之前,用冈田酸(OA)培养第三个培养物20分钟。用SDS-PAGE分离重复提取物(60μg),然后用Sp1抗体进行Western blot分析(左),或用标记的NRE探针进行Southwestern分析(中、右)。为了控制NRE结合特异性,在存在过量未标记NRE探针的情况下也进行了西南分析(右)。Sp1标注栏由箭头标记。(B) NRE上络合物形成的On-rate动力学。在EMSA结合缓冲液中培养由未处理(1至9道)或NDF处理(10至18道)细胞制备的整个P-19细胞提取物。取下等量的样品,用标记的NRE探针培养指定的时间间隔。培养结束后,将样品装入流动性转换凝胶中。NRE特定复合体的位置由实心箭头(最慢的复合体)、开放箭头和括号(迁移最快的复合体”)标记。时间标记为秒(“)或分钟(')。注意,由于在凝胶上加载样品时进行连续电泳,所有括号标记的带代表相同的复合物。

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