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同源建模和交联质谱(XL-MS)与LEM2激活CHMP7的WH域波动机制一致。

,使用XL-MS进行赖氨酸-赖氨酸杂交肽映射的工作流程。BS3交联具有Cα-Cα距离<~3nm的表面可访问赖氨酸残基。b条,CHMP7和LEM2的翼螺旋(WH)结构域的同调模型补充表2CHMP7的WH1包含一个膜结合区域,表示为环4.c(c),CHMP7 ESCRT-III在开放和闭合构象中折叠的同源模型。阿尔法螺旋1-2(绿色),3-4(橙色)。d日通过对CHMP7单体的XL-MS分析确定的距离限制映射到开放和封闭同源模型。Cα-Cα距离>3 nm被视为违规。满意的约束以蓝色显示,违反的约束以红色显示。开放的ESCRT-III构象被拒绝。e(电子),顶部:VPS25和ESCRT-III螺旋之间的结晶界面28用作CHMP7 WH2与CHMP7 ESCRT-III结构域相互作用的XL-MS通知同源模型的模板。有关模板结构的详细信息,请参见补充表2.中部和底部:当映射到闭合CHMP7-ESCRT-III模型(中部和下部面板)时,所有交联都满足,并且与域连接性一致。将WH1映射到同一界面时,交联子集不满足要求(数据未显示)。(f)左:通过对CHMP7单体的XL-MS分析确定的距离限制,映射到聚合CHMP7的构象,与2D类别平均值一致。违反约束表明CHMP7 WH1和WH2之间存在铰链区域,允许其WH1靠近ESCRTIII堆芯(黑色箭头)。右:显示违反WH2限制。