扩展数据图8|

一siRNA处理细胞中GFP-tubulin和H2B-mChr的活细胞成像。代表2个生物重复的图像，并在b条时间0是指完全解理沟进入的时间。刻度2μm。b条左：NE蛋白SUN2 LEM2缺失后微管蛋白表型的正交视图。代表3个生物复制的图像。刻度5μm。右图：具有核小管蛋白缺陷、内衬内核膜的末期细胞的平均百分比（通过层粘连蛋白B2的免疫荧光评估）。绘制的数据为3个生物重复的平均+/-SEM（siControl：n个=75, 35, 37; 单个LEM2–1：n个=72, 35, 37; 单个LEM2–2：n个=45、34、34）。采用双尾非配对t检验确定p值。无多次比较。c（c），左图：siRNA治疗后末期U2OS细胞中53BP1免疫荧光定位的示例图像，如右图所示。刻度5μm。右图：对≥5 53BP1核病灶的末期细胞百分比进行量化。根据3个生物复制品测定的≥5 53BP1病灶末期细胞的平均+/-SEM百分比（siControl：n个=56, 52, 44; 单个LEM2–1：n个=64, 56, 26; 单个LEM2–2：n个=74, 50, 40). 采用双尾非配对t检验确定p值。无多次比较。底部：免疫印迹证实U2OS细胞内源性LEM2的缺失，使用之前在其他人类细胞系中验证过的siRNA寡核苷酸，包括HeLa（免疫印迹来源数据显示于补充图1)^4,19。d日、MT、LEM2指示组合的阴性染色EM_{NTD-连接器-WH}和CHMP7_{佛罗里达州}.刻度25 nm。代表2个技术复制品的图像。e（电子），表达所示siRNA-resistant结构并用所示siRNA处理的细胞的示例图像。紫色为LEM2-mChr，蓝色为DAPI染色的DNA，绿色为微管蛋白免疫荧光。细胞被阻滞在S期，然后进行一轮分裂，导致间期细胞群刚刚退出有丝分裂。我们观察到表达LEM2的细胞中高度不规则的细胞核数量增加_Δ压力-mChr或LEM2_ΔWH-mChr与表达全长LEM2甚至LEM2缺失的细胞相比。值得注意的是，变形细胞核通常与微管紊乱和LEM2异常积聚有关_Δ压力-mChr和LEM2_ΔWH-百万立方厘米。显示了具有代表性的核、微管蛋白和LEM2表型以及与核循环评分的对应关系。微管蛋白通道中标注了核边界和圆度分数。刻度5μm。这些发现表明，干扰LEM2的微管相互作用域和ESCRT结合域之间的合作会改变核形态，表明这两种活动都是必要的，但都不足以进行NE重组。此外，一种活性的存在而没有另一种活性对核形态有害。（f），用指示的siRNA处理的间期亲代HeLa细胞和表达指示的siRNA抗性LEM2构建体的细胞中的核圆度的定量。绘制的数据是来自3个生物复制品的平均+/-SEM（siControl亲本：n个=105, 46, 80; siLEM2-2父母：n个=102, 116, 59; si对照LEM2 mChr：n个=153, 53, 122; siLEM2–2 LEM2 mChr：n个=84, 81, 105; si控制LEM2_ΔSY-百万立方英尺：n个=123, 68, 144; 单LEM2–2 LEM2_ΔSY-百万立方英尺：n个=93, 95, 105; si控制LEM2_Δ压力-百万立方英尺：n个=149, 123, 58; 单LEM2–2 LEM2_Δ压力-百万立方英尺：n个=49, 31, 42; si控制LEM2_ΔWH-百万立方英尺：n个=116, 96, 94; 单LEM2–2 LEM2_ΔWH-百万立方英尺：n个=85, 32, 68). 使用双尾非配对t检验确定p值，比较所示处理之间小于0.6（蓝色表示）的圆度得分。无多次比较。克，免疫印迹显示与mCherry融合的siRNA-resistant结构与内源性LEM2的相对水平。2个技术副本的代表。有关免疫印迹源数据，请参见补充图1。