结果
TLCN缺乏小鼠树突状突起的形态学异常
TLCN的树突特异性表达促使我们比较树突形态野生型和TLCN缺乏小鼠之间的端脑神经元。因此，我们注意到树突状突起的细微但显著的形态学异常TLCN缺乏小鼠。野生型和野生型海马CA1锥体神经元用DiI标记TLCN缺乏小鼠，树突状丝状伪足和对树突顶端的棘进行定量。出生后第7天（P7）脊髓发生发生在海马CA1区(Fiala等人，1998年)野生型小鼠海马神经元丰富有细长的树突丝状突起，称为树突丝足(一，箭头）。密度野生型小鼠树突状丝状伪足的数量高于脊椎的数量(C类，打开酒吧）。相比之下TLCN缺乏小鼠的大多数树突状突起已经是同一脊髓阶段(B类,C类,填充条）。
TLCN缺乏的海马脑片树突状突起的形态学改变。一,B类，两个DiI-标记的CA1锥体神经元顶端树突的代表性图像野生型(一)和TLCN缺陷(B类)P7小鼠。比例尺，4μm。箭头，树枝状丝状伪足；箭，刺。C类，密度野生型小鼠CA1锥体神经元顶端树突上的丝状体和棘(□;n个=3）和TLCN缺乏小鼠(▪;n个=3）第7页。注意，TLCN缺陷的神经元显示丝状伪足密度显著降低，棘密度显著升高。*第页< 0.05, **第页<0.01（双尾t吨测试）。D类,E类，两幅有代表性的树突顶端图像DiI-标记的野生型CA1锥体神经元(D类)和TLCN缺乏(E类)成年期小鼠（10只周）。比例尺，3μm。F类，密度野生型CA1锥体神经元顶端树突上的丝足和棘（□）和TLCN缺乏(▪) 成年期小鼠。在以下方面没有差异野生型小鼠树突状突起密度观察(n个=3）和TLCN缺乏小鼠(n个= 3).G公司，脊柱长度的累积频率图成年CA1神经元。两组之间的脊柱长度分布没有差异野生型和TLCN缺乏小鼠。H（H），平均脊柱TLCN缺乏小鼠和野生型小鼠的成年CA1神经元长度相当老鼠。我，尖头累积频率图成年CA1神经元的宽度。较宽脊椎的比例明显更大TLCN缺乏小鼠比野生型小鼠（Kolmogorov–Smirnov试验；第页< 0.01).J型，平均脊柱TLCN缺乏小鼠成年CA1神经元的宽度明显大于TLCN缺失小鼠野生型小鼠（双尾t吨测试**第页< 0.01).G–J型，野生型小鼠：n个=3567根棘；TLCN缺乏小鼠：n个=3552根脊椎。误差线表示SEM。
在成年小鼠中，几乎所有树突状突起都是野生型和TLCN缺乏神经元(D类-1F类). 然而，脊柱头部的宽度TLCN缺乏小鼠显著增大(我,J型)，而在野生型和突变型小鼠的脊髓长度(G公司,H（H）). 这些结果表明TLCN调节发育中和成熟大脑中树突状突起的形态。
TLCN在树突丝状伪足中高度表达
为了研究TLCN在突触发生过程中的详细定位和功能，我们使用了在随后的实验中培养海马神经元。首先，免疫细胞化学第14天用抗TLCN抗体对培养的神经元进行染色在里面体外（DIV）。TLCN仅限于MAP-2阳性的体脂素隔间(一)但缺席来自神经丝阳性轴突室(F类)，确认我们之前的报告(Benson等人，1998年). 此外，在放大倍数(B类–E类,2G公司–J型)发现TLCN存在于树枝状丝状伪足(E类,J型，箭头），以及沿树枝状轴。抗体标记活海马神经元的细胞表面识别TLCN的细胞外区域显示出与标记细胞固定和渗透后的TLCN细胞质区域（补充，网址为网址：www.jneurosci.org作为补充材料). 这个结果清楚地表明TLCN蛋白存在于树突丝状伪足和树干的质膜上。
培养海马神经元中TLCN的树突状特异性定位。A–J，培养的14 DIV海马神经元TLCN和MAP-2（树突状标记物）双重免疫染色(A–E)或神经丝（轴突标记物）(F–J型). 在合并的图像中，TLCN（绿色）与MAP-2共定位(一,D类,E类，洋红）但不是带神经丝(F类,我,J型，洋红）。TLCN是经常被排除在轴突交叉的树突节段之外(我，箭头）。高功率视图(E类,J型)显示树突丝状伪足（箭头）的TLCN定位。比例尺：一,F类，30微米；B–D类,G–I型，5微米；E类,J型，2微米。
因为树突丝状足类被认为是树突棘的前身，我们研究了突触发生过程中丝状足到脊椎的转变是否伴随着TLCN定位发生变化。为了清楚地显示树突突起的形态，用膜靶向GFP转染培养的海马神经元并进行免疫染色转染24小时后使用抗TLCN抗体。当大多数树突状突起为丝状突起(B类)，TLCN在树枝状丝状伪足（66.7±13.0%）以及沿着树突轴(一,B类). 15 DIV时当丝状伪足密度达到最大时，棘开始出现(D类)，TLCN大量表达在大多数树突丝状伪足（89.2±3.7%）和一些脊椎中发现增加(41.8 ± 4.4%) (C类,D类,G公司). 在22 DIV时丝状伪足的密度降低，棘的密度显著增加(F类)，两种类型中都存在TLCN突起（丝状足，85.2±6.8%；棘，61.0±8.0%）(E类,G公司).然而，在培养海马神经元的整个发育过程中，TLCN是在大多数树突状丝状伪足中检测到，而只有大约一半的树突状伪足脊椎(G公司). 这些结果提示丝虫到脊椎的转变与TLCN的减少有关树突状突起中的表达。
棘突触的成熟伴随着TLCN的排除
新生突触最初是在高度活动的树突丝状足上形成的(Saito等人，1992年;Ziv公司和Smith，1996年). 此后，发生丝状体到脊椎的转变伴随着突触的成熟和稳定。因此，我们检查了树突状突起TLCN表达的变化与突触成熟相关。为了监测突触发生，我们用抗体对培养的海马神经元进行免疫染色抗突触素（突触前标记）和PSD-95（突触后标记）。Synaptic公司位点被定义为包含紧密相邻的PSD-95簇的结构突触素簇（参见材料和方法）。此外，我们比较了TLCN与αN-catenin的定位经典钙粘蛋白(Hirano等人，1992年). 它有据报道，钙粘蛋白/αN-连环蛋白复合物在成熟细胞中高度表达在稳定突触方面起着关键作用(Uchida等人，1996年;Togashi等人。，2002;Abe等人，2004年). 在7和14 DIV，沿着树突轴和丝足类观察到小的PSD-95簇，其中一些是非突触素的，没有对应的突触素簇（数据未显示B类,D类). 超过一半的突触PSD-95簇（7 DIV，57.6±5.3%；14 DIV，54.9±5.3%）6.3%）与TLCN免疫反应重叠(一,B类,米,N个). 在相反，在相同的发育阶段，αN-catenin的表达非常低且仅与突触PSD-95簇稍有重叠（7个DIV，13.4±1.3%；14分，9.7±1.3%）(C类,D类,米,N个). 在21 DIV，突触PSD-95簇的大小和数量增加(F类,H（H）,米). 的数量TLCN阳性图谱仍占总突触簇的一半左右(46.4 ± 5.8%) (E类,F类,米,N个).αN-连环蛋白簇的大小和数量急剧增加，其中许多与突触PSD-95簇重叠（54.0±5.2%）(G公司,H（H）,米,N个). 在28 DIV当突触进一步成熟和稳定时TLCN阳性突触显著减少（31.1±4.1%），而αN-连环蛋白阳性突触保持较高水平（50.5±3.8%）(我–N个). 这些结果提示TLCN存在于树突状丝状伪足的未成熟突触后位点突触发生的早期阶段，在后期阶段。此外，这些数据意味着细胞粘附系统在突触成熟：从丝状足的TLCN到脊椎的钙粘蛋白/连环蛋白。
随着突触的成熟，TLCN逐渐从脊椎中排除。A–L，培养的14 DIV海马神经元(A–D)，21类(E–H（E–H）)和28 DIV(I–L型)对TLCN进行三重免疫保护(一,B类,E类,F类,我,J型，绿色）或αN-连环蛋白(C类,D类,G公司,H（H）,K（K）,L（左），绿色）PSD-95（红色）和突触素（Syn）（蓝色）。具有PSD-95集群的Synaptic站点在21和28 DIV处经常观察到类似突触素簇。注TLCN和αN-连环蛋白。在F类和J型，箭头和箭头表示TLCN-阳性和-负突触簇。在H（H）和L（左），箭头表示αN-catenin阳性突触。米，总密度（阴影条），TLCN-阳性（开放条）和αN-连环蛋白阳性（填充条）突触不同发育阶段（7、14、21和28 DIV）的PSD-95集群文化。柱状图显示了每个发育阶段10个神经元的平均±SEM时间点。突触的总数代表了平均20个神经元。N个、TLCN-阳性百分比（○）和αN-连环蛋白阳性（•）突触PSD-95簇培养中的发育阶段（7、14、21和28 DIV）。图表显示平均值±每个发育时间点10个神经元的扫描电镜。在早期阶段（7和14 DIV），TLCN阳性突触比αN-catenin阳性突触丰富突触。相反，在后期（28 DIV）αN-连环蛋白阳性突触超过TLCN阳性突触（双尾t吨测试*第页< 0.01).O（运行）,P（P），双精度巴松管（洋红色）和TLCN（绿色）的免疫染色。14 DIV，Bassoon-阳性突触前簇通常与TLCN-阳性丝状伪足并列(O（运行），箭头）。在21 DIV，一些巴松星系团与TLCN无关(P（P），箭头），而其他人仍与TLCN阳性树突状突起相对应(P（P），箭头）。问,R（右）、GluR2（品红色）的双重免疫染色TLCN（绿色）。14 DIV时几乎检测不到GluR2(问)但在排除TLCN的21 DIV时积聚在脊椎中(R（右），箭头）。S公司,吨、GABA双重免疫染色一受体（品红色）和TLCN（绿色）。GABA集群一受体显示无与14 DIV的TLCN定位相关(S公司)和21 DIV(吨). 比例尺：A–L，3微米；O–T，5微米。
我们经常在培养的树突状干上发现TLCN阴性斑块海马神经元(,). 仔细观察发现这些TLCN阴性斑块对应于神经丝阳性轴突交叉的树突段(G公司,H（H）,我，箭头）。因此，它是很可能TLCN蛋白被排除在树突和杂交的接触位点之外轴突以及与突触前轴突接触的成熟树突棘。
我们通过与巴松管、GluR2、，和GABA一受体。巴松管是活性区小泡的组成部分簇定位于新生和成熟突触前部位。巴松管群在突触前部位检测到的时间早于突触素的出现集群(汤姆·迪克等人，1998年;Friedman等人，2000年). 在14 DIV，一些TLCN-阳性丝足类针头与小巴松管簇相对(O（运行），箭头），可以视为未成熟突触，但也有许多TLCN阳性的丝状伪足与轴突轮廓的接触(O（运行），箭头）。在21 DIV，一些巴松星系团与TLCN-阳性树突和树干(P（P），箭头），而其他在TLCN-阴性上发现树状轴段(P（P），箭头）。GluR2是一种AMPA受体亚单位，存在于成熟细胞中突触后位点，其外观几乎与PSD-95和αN-连环蛋白。在14 DIV时，GluR2几乎无法检测到(问). 在21 DIV时，GluR2表达显著增加在成熟脊椎中观察到，但多刺GluR2簇没有与TLCN共定位(R（右），箭头）。这些结果支持TLCN在树突上未成熟突触后位点高度表达的观点丝状伪足与Bassoon阳性的新生突触前位点并列，但在成熟期不存在GluR2阳性的突触后位点。相反，在抑制性突触GABA公司一受体定位于树突轴上的突触后部位脊椎上没有，在14和21 DIV。GABA的一个亚群一受体是发现与TLCN共定位，但TLCN之间似乎没有关系分布与抑制性突触成熟(S公司,吨).
TLCN过度表达导致树突丝状伪足密度增加
树突丝足类中TLCN的富集和成熟突触中TLCN的下调提示TLCN可能在树突丝状伪足的形成或维持中发挥作用。为了检验这种可能性，我们在海马神经元中表达了兔TLCN16–20 DIV，此时正在积极进行丝虫到脊椎的转变。神经元通过共转染膜靶向GFP观察形态。48小时后，模拟转染的神经元具有高密度的蘑菇状棘（1.78±0.08每10μm；n个=5）和低密度树枝状丝状伪足（0.29每10μm±0.11；n个= 5) (一,B类)就像控制神经元一样(G公司). 与此形成鲜明对比的是，TLCN过度表达的神经元显示出较低的棘密度（0.90±0.08/10微米；n个= 4;第页=0.0001），密度更高丝状体（1.73±0.16/10μm；n个= 4;第页=0.0001) (D–F型).
通过TLCN过度表达增加树突丝状伪足的形成。一,D类，低功率控制图像(一)和TLCN过度表达(D类)22 DIV海马神经元。B类,C类,E类,F类，高功率控制视图(B类,C类)和TLCN过度表达(E类,F类)22 DIV处的枝晶。B类和E类是的图像GFP荧光，以及C类和F类显示用标记的TLCN的外源表达兔TLCN特异性抗体。控制枝晶主要为蘑菇状这个阶段的脊椎(B类). 相比之下TLCN过度表达的树突显示出许多树突丝状伪足(E类).G–I型,模拟后6小时和30小时控制神经元树突状片段的三例转染。J–L树枝状结构的三个例子转染后6和30小时TLCN过度表达的神经元片段。比例酒吧：一,D类，10微米；B类,C类,E类,F类，5微米；G–L，3微米。米，不同形态模式的百分比通过比较术后6小时和30小时的显微图像检测到的变化转染*第页< 0.05, **第页< 0.01（双尾t吨测试）。类型1，稳定脊椎（脊椎在6小时后保持30小时时为棘）；2型，树突轴形成新脊柱；类型3，脊椎消失；类型4，丝状伪足向棘的转化；类型5，脊椎向丝状伪足的逆向转化；6型，稳定丝状伪足；类型7，树枝状轴形成的新丝状伪足；8型，丝状伪足消失。每次转染从10个神经元收集数据（对照，547个突起；TLCN过度表达，477个突起）。
探讨TLCN过度表达如何诱导树突状细胞密度增加丝状伪足和脊椎密度降低，我们对培养神经元的树突进行成像转染后6和30小时。树突状突起的形态学变化为分为八类并量化(米). 在模拟转染神经元中，稳定的棘（1型，52.4±3.1%）约占树突突起的一半，而丝状伪足由脊椎（类型5，1.2±0.6%）或树突轴（类型7，1.2±0.9%）很少观察到(G公司–我,米). 相反，TLCN过度表达导致稳定脊柱显著减少（1型，19.5±2.1%），从脊椎到丝状足类的回复急剧增加（类型5，18.1±2.3%）、稳定的丝状伪足（6型，16.6±3.5%）和新形成的丝状假足（类型7，10.2±1.5%）。因为树突棘消失的百分比TLCN过度表达后（3型，18.0±2.7%）与对照组几乎相似（类型3，19.8±1.8%），TLCN过度表达不会改变树突状细胞的半衰期脊椎。这些结果表明，TLCN诱导丝状伪足数量增加通过多种机制：从脊椎到丝状伪足的反向转化原有丝状伪足的维持和树枝状新丝状伪肢的伸长轴。
据报道，丝状足到脊椎的转变伴随着动态各种功能性突触分子定位的变化(Hering和Sheng，2001年;埃勒斯，2002). 例如，PSD-95和F-actin的表达增加在成熟棘中积累，但不在丝足类中积累，并且在棘突触的稳定性(Allison等人。，2000;El-Husseni等人，2000年;Marrs等人，2001年;Okabe等人，2001年). 因此，我们分析了TLCN是否诱导丝状孢子虫这种形成与PSD-95和F-actin的突触后定位有关。处于控制中神经元、树突状棘主要表现为PSD-95和附着在突触素簇上的F-肌动蛋白(一–D类,我–L（左）).相比之下，TLCN过度表达的神经元表现为弥漫性PSD-95和F-actin染色树突状突起与突触素簇在树突状轴上的积聚(E类–H（H）,米–P（P）).因此，TLCN过度表达减少了PSD-95和F-actin的突触聚集，这表明TLCN可能作为突触后靶向功能的负调节器分子。
TLCN过度表达导致突触PSD-95和F-actin的聚集性下降。A–H，控件的代表图像(A–D)和TLCN过表达(E–H（E–H）)GFP三重标记树枝晶(一,E类; 绿色输入D类,H（H）)，PSD-95(B类,F类; 红色输入D类,H（H）)、和突触素(C类,G公司;蓝色输入D类,H（H）).I–P公司，控件的代表图像(I–L型)和TLCN过度表达(M–P公司)三重标记GFP的树突(我,米; 绿色输入L（左）,P（P）)、阴茎肽(J型,N个; 红色输入L（左）,P（P）)、和突触素(K（K）,O（运行）;蓝色输入L（左）,P（P）). 比例棒材，3μm。Syn，突触体素。
TLCN是一种I型完整膜蛋白，由长的细胞外区域组成（825 aa）具有九个串联排列的Ig样结构域、一个跨膜区域（26 aa）和一个短胞质尾（61aa）(一). 因此，TLCN在树突的表面膜上表达丝状伪足可能与细胞外基质中的一些未知配体相互作用或在传入的轴突上，通过其细胞质域向树突丝状体维持丝状体或减少丝状体至脊椎转型。为了检验这种可能性，我们转染了培养的海马神经元TLCN的截断或嵌合突变体。转染细胞的免疫染色抗兔TLCN或抗CD8抗体证实野生型的表达水平突变蛋白具有可比性。通过共转染评估树突形态膜靶向GFP。缺失突变体TLCNΔ52，缺乏大多数细胞质区（C末端52 aa被删除）(一)，不会引起脊椎密度的任何变化，或丝状足类(B类,C类). 此外，另一个缺失突变，TLCNΔ4，在C末端仅缺少四种氨基酸(一)，也没有显示效果(B类,C类)，表明TLCN的细胞质区域，尤其是C末端，对于形成树枝状丝状伪足。因为TLCN（-L-T-S-A）的C端氨基酸序列兔和人TLCN-小鼠TLCN中的L-T-S-S）与共识相似PDZ（PSD-95/椎间盘大/闭塞带-1）-结合基序（-X-T/S-X-V）的序列，TLCN可能与一些细胞内信号分子和/或支架分子与PDZ相互作用域。进一步构建了一个嵌合分子（CD8/TLCN），由无关免疫分子CD8的细胞外和跨膜区域，以及TLCN的细胞质区(一). 这种CD8/TLCN嵌合体也在海马神经元中表达未能诱导树突突起的形态发生任何明显变化(B类,C类)，建议TLCN胞外区域的重要性。总之，这些结果表明TLCN的细胞外和细胞质区域都是形态学所必需的TLCN过度表达诱导的树突状突起变化。
丝状伪足形成需要全长TLCN。一，外源分子示意图表达于海马神经元。B类,C类、树枝状丝状伪足的密度(B类)和脊椎(C类)转染单个结构的培养海马神经元一注意，只有全长TLCN会导致树突状突起的形态学改变。数据收集自>10个神经元。条形图上的数字表示个体总数每个构造的实验。误差条表示SEM*第页<0.01（双尾t吨测试）。全长兔TLCN；TLCNΔ52，细胞质区缺乏C末端52 aa；TLCNΔ4，细胞质区缺乏C-末端4aa的TLCN；CD8，全长人CD8；CD8/TLCN，一种由细胞外CD8的跨膜（TM）区域和TLCN的细胞质区域。
TLCN缺乏神经元棘的快速成熟
获得功能实验（TLCN过度表达）显示直接参与了TLCN在树突形态发生中的作用：丝状伪足密度的增加和伴随而来的脊椎密度的降低。接下来，我们详细探讨了TLCN功能丧失在体外通过培养海马神经元TLCN缺乏小鼠(Nakamura等人，2001年).因为TLCN在海马99%含有CaMKII的神经元中表达(Benson等人，1998年)，我们比较了树突野生型和TLCN缺乏小鼠CaMKII阳性神经元的形态学(B类,D类). 10 DIV时，TLCN缺陷神经元的脊椎密度显著高于野生型神经元(F类)，而丝状伪足密度无差异(E类). 此外，TLCN缺乏的神经元含有较大的整个开发过程中的PSD-95集群（数据未显示）。
促进TLCN缺乏神经元的脊柱成熟在里面体外.A–D，的代表性图像野生型（+/+；一,B类)和TLCN-缺乏（−/−；C类,D类)老鼠。一,C类、GFP荧光（绿色）和突触素（洋红色）免疫标记。B类,D类，与相同的字段一和C类分别用抗CaMKII染色抗体。比例尺，1μm。E类,F类、丝状伪足密度(E类)和脊椎(F类)野生型（□）和缺乏TLCN(▪) 不同神经元发育阶段（10、15和22 DIV）*第页< 0.05,**第页<0.01（双尾t吨测试）。G公司，脊柱长度的累积频率图22个DIV神经元。两组之间的脊柱长度分布没有差异野生型和TLCN缺乏小鼠。H（H），平均脊柱22个DIV神经元的长度在TLCN缺陷小鼠和野生型小鼠之间相当老鼠。我，尖头累积频率图22个DIV神经元的宽度。较宽脊椎的比例在TLCN缺乏小鼠比野生型小鼠（Kolmogorov–Smirnov试验；第页< 0.01).J型，平均脊柱22个DIV神经元的宽度在TLCN缺陷小鼠中比在野生型小鼠（双尾t吨测试**第页< 0.01).G–J型，数据收集自>10三到四个独立实验中的神经元（野生型脊髓，n个= 231; 缺乏TLCN的脊椎，n个= 278). 错误条表示SEM。
在15 DIV时，野生型神经元仍然拥有大量树突丝状体(一，箭头），TLCN缺乏神经元显示出较低密度的丝状伪足和较高密度的棘(C类)比野生型神经元(E类,F类).此外，在TLCN缺乏的神经元中，大多数突触素簇与脊椎头部(C类，箭头），而在野生型神经元中，它们大多与树突状轴相对(一). 因此，TLCN缺乏的神经元树突形成期间，丝状伪足较少，功能性棘增加较快发展。
在22 DIV时，树突密度不再有任何显著差异野生型和TLCN缺陷神经元之间的突起(E类,F类). 然而，脊椎头部的宽度TLCN缺乏的神经元明显大于野生型神经元(我,J型)，而脊柱长度没有差异(G公司,H（H）). 这些结果让人想起体内形势()和提示TLCN可能对脊柱成熟起负调节作用。
讨论
发育中的神经元：TLCN保存树突丝状体
突触发生通过动态和顺序步骤进行：丝状体从树突轴，丝状体和轴突之间的初始接触，从丝状体到棘，成熟突触的稳定。树状丝状伪足发育过程中在未成熟神经元中大量发现，包括“临界期间。”丝足类动物活动性很强，好像在寻找轴突末端建立适当的突触连接(齐夫和史密斯，1996;Fiala等人，1998年;Lendvai等人，2000年). 此外，最近的延时影像学研究揭示了脊椎向丝状伪足的逆转(Dunaevsky等人，1999年;Marrs等人。，2001). 因此，丝状伪足可能不仅在起始阶段发挥重要作用突触接触，但在发育过程中功能性突触的精细化大脑。
在这里，我们表明TLCN位于树突丝状伪足中，并逐渐被排除在突触发生过程中的棘。此外，树突上TLCN的存在与轴突初次接触前的丝状伪足表明TLCN可能在突触形成的早期步骤。此外，TLCN的过度表达诱导了丝状伪足急剧增加，脊椎随之减少。相反，TLCN缺乏的神经元显示丝状伪足密度较低，棘突迅速增加在开发过程中在体外和体内.从这些结果，我们推测TLCN通过促进和保存丝状伪足并减缓其成熟为棘（补充，网址为网址：www.jneurosci.org作为补充材料).
TLCN维护丝状孢子虫的生理意义是什么？尽管功能树突丝状伪足仍然是个谜，它们是动态和瞬态结构可能会有一个突触形成的“试验期”。高度能动性丝状伪足将有利于树突与大量传入细胞直接相互作用轴突和增加选择合适突触前伴侣的机会。TLCN可能作为一种“柔软剂”，赋予塑料和柔性特性树突状突起，例如通过激活突触。阐明TLCN的功能体内，的视觉期间对突触成熟进行了电生理分析野生型和TLCN缺陷小鼠的皮层发育。有趣的是，TLCN缺乏小鼠表现出接受野特性的加速成熟（眼部优势可塑性和方向偏好），个人通信）。因此，TLCN肯定参与了突触的发育体内TLCN对丝状伪足的保存可能是一个重要的步骤用于形成功能神经回路。由于中没有此步骤TLCN缺乏的小鼠，脊椎形成加快，由此产生的突触可能迅速形成变得精力充沛。
TLCN对发育中突触可塑性的参与可能仅限于兴奋性突触，因为TLCN动力学与GluR2和PSD-95的聚集相关进入脊椎，但没有GABA的定位一树突上的受体轴。这一观点得到了我们之前对嗅球，显示TLCN在突触后膜上的特异定位树突相互作用中兴奋性突触，而抑制性突触二尖瓣细胞与颗粒细胞的接触(村上春树等人，1991年).
