图4。

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[A30P]αSYN在转基因小鼠脑中的表达。A类,转基因结构示意图(未按比例绘制)。带阴影的盒子,mThy-1.2启动子区。打开箱子,Thy-1外显子序列;(截短的)外显子IV包含多聚腺苷酸化信号。实线,Thy-1内含子A.人[A30P]αSYN开放阅读框的启动和终止密码子(填充的框; *, A30P突变位点)直接位于Xho公司I限制站点(X(X)).虚线Thy-1基因的3′-区。N个,不是I限制位点用于在微注射之前线性化构建和删除矢量序列。B类将两种人类αSYN转基因特异探针和一种小鼠β-actin基因探针的混合物杂交到poly(A+)如图所示,来自[A30P]αSYN小鼠的RNA。转录本的大小分别为~1.8 kb和2.1 kb。C–E类对6~10周龄[A30P]αSYN小鼠系个体的全脑细胞液(200μg)的冻干热稳定上清液进行15%的SDS-PAGE。转移后凝胶的亮蓝染色证明负载量相等。用小鼠特异性抗血清7544连续检测蛋白质印迹(C类)、Mc42(D类)和人类特异性抗体3400(E类). 通过密度扫描量化色带(底部面板). 每个品系至少有三只动物的[A30P]αSYN蛋白表达筛选数据具有代表性。αSYN-免疫活性双谱带(星号)在可变强度下观察到与29kDa标准相一致的位置,该位置与二聚体的分子质量一致。这些假定的二聚体物种可以在大凝胶中很好地溶解(P10DS;猫头鹰分离系统,新罕布什尔州朴茨茅斯)(F类). 来自10个月龄18系小鼠的全脑细胞液(600μg)直接接受15%SDS-PAGE,无需任何浓缩步骤。用3400抗体进行Western blot检测。