图EV2
A类 稳定转染表达EGFP、FUS‐DDIT3‐EGFP或EWSR1‐FLI1‐EGFP的HT1080细胞系复制R2组蛋白修饰的免疫印迹分析（IB）。 针对H3K27Ac、H3K17me3、H3K 4me3和组蛋白负载控制H4的抗体用于检测组蛋白修饰和针对EZH2的抗体，负载控制GAPDH用于评估催化PRC2量。 用GFP抗体进行免疫印迹分析可以验证FET融合癌蛋白和EGFP的表达。 稳定的重复R1如图所示 4 答：。 B类 HT1080和HT1080瞬时表达FUS‐DDIT3‐EGFP或EWSR1‐FLI1‐EGFP（瞬时转染24或48小时后采集的样品）的免疫印迹分析（IB），以及抗H3K27Ac、H3K27 me3、H3K 4me3抗体， 组蛋白负载控制H4用于检测组蛋白修饰和EZH2抗体，负载控制GAPDH用于评估催化PRC2量。 用GFP抗体进行免疫印迹分析可以验证FET融合蛋白的表达。 C、 D类 HT1080和HT1080 FUS‐DDIT3‐EGFP（C）或HT1080 EWSR1‐FLI1‐EGFP（D）的免疫印迹分析（IB）（均为稳定表达），带有针对H3K27me3、H3K4me3和组蛋白负载控制H4的抗体。 用GFP或FLI1抗体进行免疫印迹分析，以验证FET融合蛋白和正常FLI1的表达。 注意，内源性FLI1约50 kDa在HT1080细胞系中表达。 E类 未经处理的EWS TC‐71提取物、用5μM他汀类药物处理72小时的细胞和DMSO对照的免疫印迹分析（IB）。 使用针对H3K27me3、H3K4me3和组蛋白负载控制H4的抗体进行检测，结果表明，在使用他汀类药物抑制EZH2后，H3K17me3显著降低。 F类 显示数量的图表，从图中的免疫印迹定量 4 与HT1080 EGFP、HT1080 FUS‐DDIT3‐EGFP和HT1080 EWSR1‐FLI1‐EGFF的负载控制GAPDH相比，H3K27me3、H3K4me3和H3K27 Ac（与相应的组蛋白负载控制H4相关）的A（R1）或面板（A）（R2）、H3K 27me3/H3K4me3以及EZH2的数量。 每个图表面板显示一个实验的数据。 G公司 图表显示了H3K27me3、H3K4me3和H3K17Ac（与相应的组蛋白负载控制H4相关）的数量，H3K24me3/H3K4me3的比率，以及与HT1080 FUS‐DDIT3‐EGFP和HT1080 EWSR1‐FLI1‐EGFP的负载控制GAPDH相比EZH2的数量，这些数据来自于面板（B）中的免疫印迹。 在24小时或48小时瞬时转染后采集样本。 每个图表面板显示一个实验的数据。 H、 我 显示H3K27me3和H3K4me3的量（相对于相应的组蛋白负载对照H4）以及从面板（C）量化的HT1080 FUS‐DDIT3‐EGFP（H）或从面板（D）量化的HT1080 EWSR1‐FLI1‐EGFP（I）的H3K27me3/H3K4me3比率的图（均为稳定表达）标准化为亲本HT1080。 每个图表面板显示一个实验的数据。 J型 图中显示了H3K27me3和H3K4me3（与相应的组蛋白负载量控制H4相关）的数量，以及未经治疗的EWS TC‐71、用5μM他汀治疗72小时的细胞和DMSO控制的H3K17me3/H3K4me3比率，并将其归一化为未经治疗对照。 来自一个实验的数据。