图8。

GATA2和LIM-HD蛋白与−994/−960区域（D-LIRE）相互作用，并在成人垂体内共定位。A、 DNA亲和层析显示GATA2和LIM-HD蛋白与−994/−960区域（D-LIRE）结合。通过将αT3-1或LβT2核提取物与链霉亲和素磁珠相连的生物素化DNA序列孵育来评估结合特异性。D-LIRE探针包含与包含SF1元素的−260/−237区域的一个副本相关联的−994/−960区域的八个副本。MUT探针是相同的，只是每个−994/−960区域拷贝上的三个TAAT基序都发生了突变。钴探针含有8个不含SF1元件的−260/−246启动子区拷贝，用作阴性对照。将与探针特异结合的蛋白质洗脱（洗脱液）并与未结合的蛋白质（上清液）一起在12%SDS-PAGE上进行解析，并使用所示的抗LHX3、抗SF1、抗EGR1、抗ISL1和抗GATA2抗体通过Western blot进行分析。B、 GATA共识调查是SC2的高效竞争对手。EMSA分析按照图5C.竞争实验中使用了特定的ISL1和GATA共识探针。在ISL1共识探针超过500倍的情况下，观察到SC2轻微位移，而在GATA共识探针超过50倍的情况下同一复合物的有效位移。C、 ISL1和GATA2的Colocalization with格纳尔成人垂体中的启动子活性。2个月大转基因雄性小鼠的大脑[Tg(Gnrhr-ALPP公司)1Jnl]按照材料和方法.ALPP活动反映格纳尔启动子活性如材料和方法使用ISL1和GATA2抗体进行免疫组化。DAPI被用作反染色。ALPP活性和ISL1和GATA2免疫反应在这里显示为假白色,红色、和绿色颜色。表达ALPP和ISL1的细胞的实例(白色箭头)、ALPP、GATA2和ISL1(白色箭头)，或仅ALPP(空箭头)如图所示。比例尺，100微米。