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2012年12月4日在线发布。 数字对象标识:2012-1182年10月21日

图7。

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小鼠启动子通过相当于大鼠启动子−994/−960区域的元素招募GATA2和LIM-HD蛋白。A、 大鼠和小鼠LIM-HD和GATA反应元件的结构保守性格纳尔发起人。使用欧洲生物信息研究所提供的ClustalW2程序对大鼠和小鼠启动子序列进行比对(http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/). 两个启动子的编号从ATG翻译起始密码子开始,腺嘌呤被认为位于+1位。P-LIRE位于小鼠启动子的近端,反义链(−)位于−342/−363,而大鼠启动子的相应序列位于感义链(+)的远端,位于−852/-873。相反,被称为D-LIRE的−994/−960区域位于小鼠(−927/−961)和大鼠启动子的远端位置。B、 小鼠D-LIRE比同等的大鼠启动子序列具有更高的增强子活性。通过瞬时转染αT3-1细胞,比较大鼠和小鼠D-LIRE序列的增强子活性。大鼠D-LIRE的5′序列,特别是TAAT 1赋予消音器特性。这部分序列在小鼠D-LIRE中略有不同,在5′端有三个8 bp的错配。因此,这可以解释其更大的增强子性质。C、 P-LIRE附近TSS和D-LIRE处的ChIP。利用针对三甲基组蛋白H3赖氨酸4(atriMeK4)、三甲基组分H3 lys 27(atriMeK27)、磷酸化聚合酶2(aPol-II)、LHX3、ISL1、ISL2、GATA2和GATA3的抗体,从免疫沉淀的LβT2染色质中纯化DNA,对P-LIRE和D-LIRE区域进行PCR扩增。用溴化乙锭染色琼脂糖凝胶和实时PCR进行半定量PCR分析(黑色条)按照中所述进行材料和方法“No AB”对应于在没有抗体的情况下获得的信号,用作阴性对照。将从非免疫沉淀染色质(输入样品)中纯化的DNA稀释20倍,进行PCR并用作阳性对照。

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