图3。

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GATA2抑制格纳尔促性腺激素细胞系中的启动子活性。A、 GATA2和GATA3抑制格纳尔共转染实验中的启动子活性。包含1.1(−1135/−32)或3.3(−3254/−32kb)-kb的荧光素酶启动子融合构建物格纳尔启动子(pLuc1.1格纳尔或pLuc3.3格纳尔)与表达GATA2、GATA3、GATA4和GATA6的载体或空pcDNA3载体(对照)一起瞬时转染αT3-1和LβT2细胞。48小时后测量荧光素酶活性,如材料和方法并表示为对照启动子活性的百分比。GATA2和3显著抑制格纳尔无论启动子大小,αT3-1细胞中的启动子活性。在LβT2细胞中,尽管观察到类似的模式,但只有3.3-kb启动子被显著抑制。结果为平均值±标准偏差至少进行三次独立实验,一式三份。***,P(P)< 0.001; **P(P)< 0.01; *,P(P)< 0.05. B、 GATA2 siRNA刺激格纳尔启动子活性。左侧面板,最小催乳素基因(Prl公司)单独启动子(Prl最小值将pGL3载体中荧光素酶报告基因上游的四个GATA反应元件(GATA RE 4X)与对照或GATA2 siRNA瞬时转染到LβT2细胞中。右侧面板,荧光素酶启动子融合构建物包含0.44-(−475/−32)、1.1-或3.3-kb格纳尔启动子与对照或GATA2 siRNA一起瞬时转染到LβT2细胞中格纳尔GATA2 siRNA诱导活性。含有1.1-kb启动子的构建体也受到显著刺激,尽管程度较低。pLuc0.44的活性格纳尔构造未被调制。转染后40 h测量荧光素酶活性,如材料和方法结果为平均值±标准偏差至少进行三次独立实验,一式三份。***,P(P)< 0.001; **,P(P)< 0.01; *,P(P)< 0.05. C、 GATA2 siRNA可降低GATA2蛋白水平。在相同条件下,通过放大转染,在12孔板上进行了平行实验。所示数据代表两个独立的重复实验。