图6

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抑制EpRas细胞中的NF-κB活性导致细胞凋亡并阻止EMT。(一个)将表达空载体对照、TD-IκBα或CA–IKK-2的EpRas细胞接种到胶原凝胶中,让其形成结构3天,并用TGF-β治疗6天或不治疗。胶原培养物进行原位TUNEL染色(红色)和DAPI染色(蓝色,表示活细胞)。图中还显示了TUNEL染色前拍摄的同一实验胶原蛋白凝胶的光学显微镜图像。箭头表示TUNEL阳性核。插图,右中面板:另一个具有TUNEL阳性核的结构。原始放大倍数,×200。(B类)根据胶原凝胶结构定量TUNEL阳性细胞一个在三到六个随机选择的区域中,对至少300个细胞的细胞核进行TUNEL染色。使用2到3个胶原蛋白凝胶的平均值计算凋亡指数和标准偏差。在2–3个胶原凝胶(每个凝胶至少300个细胞)中评估的每种细胞类型的凋亡细胞平均百分比显示在条形图上。(C类)表达空载体对照或TD-IκBα的EpRas细胞在有或无25μM Z-VAD-FMK(Z-VAD;第0-5天)和/或TGF-β(5 ng/ml;第1-5天)的多孔支架上培养5天。间充质链覆盖的多孔支架上面积的量化显示为与粘附细胞覆盖的总面积的百分比(在第4天,经过或不经过TGF-β治疗3天后)。(D类)在有或无TGF-β(5 ng/ml;第1-5天)的情况下,在多孔支架上培养所示细胞(有或无25μM Z-VAD-FMK;第0-5天)5天。在多孔支架上培养5天后,对细胞进行E-cadherin或vimentin(红色)的免疫染色,以及DNA(蓝色)的DAPI复染。原始放大倍数,×400。