图5

用干扰素-γ预处理R或P肿瘤细胞，然后用PD-L1阻断（αPD-L1）或同型控制（Iso）抗体。(A类)ECAR后处理。来自≥5个独立实验的数据显示相对ECAR归一化为R-Iso肿瘤***第页=0.0001. (B类)通过FACS测量肿瘤细胞对2-NBDG的摄取。来自3个独立实验的数据归一化为R肿瘤MFI值***第页=0.001. (C类)western blot分析p4E-BP1、pS6K和pS6；代表3个独立实验；FACS评估的p4E-BP1和pS6K的代表性直方图。(D类)western blot检测Akt、磷酸化Akt（pAkt）和糖酵解酶PGK1、TPI和LDHa；代表3个独立实验。(E类)表达高水平PD-L1的R肿瘤克隆用抗PD-L1抗体（αPD-L1）在冰上处理15分钟，然后在冰上保存（0分钟）或在37°C下孵育30分钟（30分钟），并在酸性溶液中洗涤，以将抗体从细胞表面分离（+酸洗）或不处理（无酸洗）。固定后，用抗鼠IgG A488（红色）培养细胞，检测细胞表面的αPD-L1。渗透后，用抗大鼠IgG A647（黄色）孵育细胞，检测表面表达和内化的αPD-L1和核染色（蓝色）。通过共焦显微镜对细胞成像。代表4个独立实验的数据。(F类)转导肿瘤细胞的ECARpdl1型shRNA（PD-L1 hp）或对照hp对抗荧光素酶（Ctrl-hp）。从2个独立的实验中，表现为相对ECAR归一化为R Ctrl hp细胞***第页<0.0001. (G公司)western blot检测p4E-BP1、pS6和pS6K；代表3个独立实验。(H（H）)Akt、pAkt，PGK1、LDHa和TPI的Western blot；代表3个独立实验。(我)干扰素-γ预处理的R或P肿瘤细胞（顶部）或经抗PD-L1治疗的PD-L1 hp或Ctrl-hp转导的肿瘤细胞（底部）上PD-L1的表达。(J型)用表达PD-L1的逆转录病毒转导后，表达高（Hi）和低（Lo）水平表面PD-L1的R肿瘤的ECAR，表示为2个独立实验的平均值±SEM。(K（K）)拉格牌手表^−/−小鼠皮下注射2×10⁶R-PD-L1表达肿瘤细胞，然后在移植后第2、5、8和11天用PD-L1抗体（αPD-L1）治疗。在第12天测量细胞外葡萄糖。点代表单个小鼠；水平条表示两个独立实验的平均值±SEM*第页=0.0319. 图5D，H（H）、和图S4D、G由于糖酵解酶的大小相似，需要进行单独的探测，因此包含来自相同负载车道的单独斑点。另请参阅图S4.