图1

A） 在稳定表达FLAG-WDR24（GATOR2的一种成分）的HEK-293T细胞中Sestrin2与GATOR2的结合。细胞被剥夺亮氨酸、精氨酸或所有氨基酸50分钟。如有指示，用亮氨酸、精氨酸或所有氨基酸重新刺激细胞10分钟，并用细胞裂解物制备FLAG免疫沉淀物。通过免疫印迹法分析免疫沉淀物和裂解物中的指示蛋白。FLAG-meta2作为阴性对照。

B） 亮氨酸和精氨酸对氨基酸保护细胞的冰镇洗涤剂裂解液中Sestrin2-GATOR2相互作用的影响。将稳定表达FLAG-metap2或FLAG-WDR24的HEK-293T细胞剥夺所有氨基酸50分钟。将亮氨酸或精氨酸添加到培养基或细胞裂解物中，并按（A）所述制备和分析FLAG免疫沉淀物。

C） 单个氨基酸对纯化的Sestrin2-GATOR2复合物的影响。从稳定表达FLAG-meta2或FLAG-WDR24的HEK-293T细胞中制备FLAG免疫沉淀，并去除所有氨基酸50分钟。将指示的氨基酸（300µM）直接添加到免疫沉淀物中，重新清洗后，对其进行分析，如（A）所示。

D） 亮氨酸破坏纯化的Sestrin2-GATOR2复合物。除使用了指示浓度的亮氨酸或精氨酸外，实验按（C）进行和分析。

E） 异亮氨酸和蛋氨酸对Sestrin2-GATOR2相互作用的干扰。除使用了指示浓度的异亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸或精氨酸外，实验按（C）进行和分析。