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2015年6月19日在线发布。2015年5月11日在线预发布。 数字对象标识:10.1128/立方米.00125-15

图9

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SLC38A9缺失影响mTOR从溶酶体到胞浆的重新定位。(A至D)293T细胞转染非靶向对照(sicon)或SLC38A9型siRNA被固定并用抗mTOR和抗LAMP2抗体标记。比例尺,10μm。(A) 示例图像。至少40000个mTOR(B和C)和LAMP2(D)阳性点的量化(n个=4)(B),110000(n个=5)(C)或19000(n个=3)(D)个细胞。sicon/fed标准,fed条件下标准化为sicon。数据表示平均值±SEM,并使用GraphPad Prism进行统计分析。采用双向方差分析和Bonferroni’s事后(post-hoc)测试(*,P(P)< 0.05; **,P(P)< 0.01; ***,P(P)< 0.001). (E) 293T细胞转染非靶向对照(sicon)或SLC38A9型siRNA。转染72小时后,对细胞进行裂解,并通过SDS-PAGE和免疫印迹分析LAMP2蛋白水平。PCNA用作装载控制。(F) SLC38A9通过依赖于细胞氨基酸状态的N末端细胞溶质域与Rag-Ragulator复合物相互作用,从而调节氨基酸依赖的mTOR定位和mTORC1活性。

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