SLC38A9调节mTORC1活性。(A和B)293T细胞转染不同的非靶向对照(sicon)或SLC38A9型如图所示的siRNAs。细胞裂解物进行SDS-PAGE和免疫印迹。使用磷酸特异性抗体测定S6K(A)、ULK1(A)和4EBP1(A和B)的磷酸化状态。PCNA用作装载控制。exp.,暴露。(C) 此外,通过RT-qPCR证实了面板A和B中SLC38A9的敲除。几何平均值。(D) 将HA-SLC38A9全长、HA-SLC38 A9 aa 1至119或空载体转染293T细胞。转染48小时后,对细胞进行裂解,并使用磷酸特异性抗体测定mTORC1底物的磷酸化状态。PCNA用作装载控制。(E) 以Torin1(1 h,250 nM)或二甲基亚砜(DMSO)作为对照,并按照D组所述进行分析。(F)分别用HA-SLC38A9全长或空载体转染稳定shRNA-介导的RHEB GTPase缺失或对照293T细胞,随后进行SDS-PAGE和免疫印迹。通过测定S6K的磷酸化状态来评估mTORC1活性。(G) RT-qPCR证实了面板F中显示的RHEB GTPase敲除。