SLC38A9与Rag GTPases的结合依赖于氨基酸和核苷酸。（A） 将GFP-SLC38A9全长、GFP-SLC38A9 aa 1至119或GFP单独转染293T-REx细胞，诱导表达HA标记的Rag GTPase蛋白。细胞要么在完全RPMI生长培养基（fed）中生长50分钟，要么被氨基酸（aa）饥饿，然后用MCLB NP-40溶解以进行GFP免疫沉淀。用SDS-PAGE和免疫印迹法分析免疫沉淀物。（B） 293T细胞用非靶向对照（sicon）或SLC38A9型siRNAs和myc-tagged LAMTOR2，以及野生型（RRAGB野生型[RB-wt]、RRAGC野生型[RC wt]和RRAGA野生型[RA wt]）或突变型（RRAGB Q99L[RB-QL]、RRAGB T75L[RB-TL]、RRACC Q120L[RC QL]、RRAGC S54L[RC SL]）HA-taged Rag GTPase蛋白，如图所示。在HEPES缓冲液中溶解细胞，进行HA-免疫沉淀，并如上所述进行分析。（C） 用对照（sicon）或SLC38A9型siRNA如图所示，随后在MCLB CHAPS缓冲液中裂解，并用HA珠免疫沉淀。用MS分析洗脱液。肽的数量显示为每种蛋白质0到100个肽。完整的蛋白质组数据见补充材料中的表S1D。（D） 在HEPES缓冲液中溶解类似于C组的细胞，然后进行免疫沉淀、SDS-PAGE和免疫印迹。（E） 如面板C所述转染猛禽过表达293T-REx细胞，在MCLB CHAPS缓冲液中裂解，并按面板D所述分析。
