建立一流的PRMT5特异性抑制剂。（A） rPRMT1的晶体结构视图（aa 41-353，蛋白质数据库[PDB]ID1或8，灰色带状表示）叠加在hPRMT5模型的C末端结构域上（aa 310-637，绿色带状表示），显示了PRMT家族催化结构域的保守性质。辅因子SAM和底物精氨酸残基结合囊分别显示为红色和蓝色区域。（B） rPRMT3晶体结构显示共结晶SAH和精氨酸残留物（紫色碳棒表示）。（C） hPRMT5模型显示对接SAH和精氨酸残基的取向与rPRMT3晶体结构相似。（D） 与hPRMT5模型对接的SAH和精氨酸（棒状代表；紫色碳）的特写视图（绿色丝带和绿色碳棒状代表中的关键残基）。（E） CMP5（棒状代表；紫色碳）与hPRMT5模型对接（绿色丝带和绿色碳棒状代表中的关键残基），显示了与残基的初始预测相互作用。为了清楚起见，图中未显示覆盖催化部位表面的残留物。（F） 使用针对对称（S）二甲基化S2Me-H4R8和S2Me-H3R8的抗体，用DMSO、CMP5或CMP6处理的JeKo细胞（MCL细胞系）的免疫荧光染色。DAPI（4,6-二氨基-2-苯基吲哚）染色细胞核。（G） 选择性PRMT5抑制剂CMP5和非反应性对照CMP6的化学结构。（H） 在DMSO、CMP5（10-100μM）或CMP6（10-100µM）存在的情况下，按照“方法”中所述进行组蛋白甲基转移酶分析。（一） hPRMT5（aa 310-637，PDB ID 4GQB，蓝带表示）C端畴的晶体结构视图叠加在hPRMT五型（绿带表示）上。（J） 叠加hPRMT5晶体结构（蓝色带和蓝色碳棒表示法）和模型（绿色带和绿色碳棒表示）的近距离催化位置视图。共晶SAM模拟物和底物精氨酸残基分别显示为黄色碳棒和线条表示。（K） CMP5（黄色碳棒表示）在优化hPRMT5晶体结构的活性部位的对接构象视图。相互作用的氨基酸残基以蓝色棒状显示。（五十） 相等的数字（0.5×106)正常B细胞（静止或激活）或指定的DLBCL细胞系（Pfeiffer和SUDHL-2）用增加浓度的CMP5处理，24小时后通过膜联蛋白V-碘化丙啶（PI）染色和流式细胞术测定细胞活力。（M） 用增加的CMP5浓度处理来自3个不同健康供体的正常B细胞，并在24、48和72小时通过annexin V-PI染色和流式细胞术测定细胞死亡。（N-O）转化细胞系（60A）和永生化细胞系（D-9）用增加浓度的CMP5处理，并在24和48小时通过annexin V–PI染色和流式细胞术测定细胞死亡。数据显示为annexin V的百分比负极圆周率负极细胞（活细胞），并将其归一化为未经处理的对照*P（P）< .05; **P（P）< .01. 误差条表示平均值的标准误差（SEM）。
