图6

(A类)用FASN-荧光素酶构建物转染表达GFP腺病毒或SRC-2腺病毒的PC-3细胞，并用高糖（11 mM）/低谷氨酰胺（0.2 mM）或高谷氨酰胺（2 mM）-低葡萄糖（5 mM）浓度刺激，然后用DMSO或torin（250 nM）处理。然后进行荧光素酶分析以测量FASN公司启动子活性，数据归一化为总蛋白(n个= 4). (B类和C类)来自C4-2细胞的SRC-2的ChIP显示SRC-2在FASN公司和SCD公司在存在或不存在托林（250nM）的情况下谷氨酰胺刺激（2mM）时的启动子。图中显示了测试的扩增子。IgG抗体用作对照，数据以输入染色质的百分比表示(n个= 3). (D类)HA–SRC-2免疫沉淀，然后进行Western免疫印迹，以使用磷酸化丝氨酸/苏氨酸抗体检测SRC-2的磷酸化状态。从表达GFP腺病毒或SRC-2腺病毒的C4-2细胞获得输入裂解物，随后用增加浓度的谷氨酰胺（0.2 mM和2 mM）刺激，然后用DMSO或mTORC1抑制剂torin（250 nM）处理。使用细胞可渗透辛基-α-酮戊二酸来缓解低谷氨酰胺水平对SRC-2磷酸化的影响。Actin被用来规范化加载输入。完整的未切割凝胶如补充材料所示。(电子)示意图描述了拟议的谷氨酰胺/mTORC1信号通路，其中SRC-2是调节协同激活SREBP-1的转录功能的关键下游介体。数据表示平均值±SEM*P（P）<0.05和**P（P）<0.001学生t吨使用Holm-Sidak多重比较测试。