谷氨酰胺刺激诱导SRC-2的mTORC1依赖性磷酸化。(A类)在含有或不含有谷氨酰胺（2mM）生长的稳定C4-2细胞shNT、sh18和sh19中FASN、SCD、SRC-2和肌动蛋白的蛋白质印迹分析。(B类)HA–SRC-2免疫沉淀，然后进行Western免疫印迹，以使用磷酸化丝氨酸/苏氨酸（p-Ser/Thr）抗体检测SRC-2的磷酸化状态。从表达GFP腺病毒或SRC-2腺病毒的C4-2细胞获得输入裂解物，随后用增加浓度的谷氨酰胺（0.2 mM、2 mM和4 mM）刺激，然后用DMSO或mTORC1抑制剂torin（250 nM）处理。Actin用于规范化输入加载控制。用密度计分析磷酸化SRC-2的半定量水平，并用数字表示每个车道下归一化为肌动蛋白的相对值（与车道2中的值相比）。(C类)Western blot分析显示3种不同的siRNA对mTOR表达的影响。(D类)用非靶向siRNA或3种不同的mTOR siRNA转染表达SRC-2腺病毒的C4-2细胞，然后用或不用谷氨酰胺（2 mM）处理。免疫沉淀HA–SRC-2，然后进行Western免疫印迹检测SRC-2的磷酸化状态。GFP腺病毒作为阴性对照。(E类)用或不用谷氨酰胺（2 mM）刺激表达HA标记的WT SRC-2或磷酸化缺陷突变体S499A、S699A和S493A的C4-2细胞。HA用于免疫沉淀WT SRC-2或突变体，然后进行Western免疫印迹以检测SRC-2的磷酸化状态。肌动蛋白用于规范化输入负荷控制（HA–SRC-2）。用肌动蛋白作为对照，使蛋白负荷控制正常化，用GFP腺病毒作为对照病毒。完整的未切割凝胶如补充材料所示。
