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图4。

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检测968与单体和二聚体GAC突变体的结合。(A类)GAC四聚体(人类亚型)与BPTES和谷氨酸盐(PDB 3UO9)复合物的晶体结构,建议的968结合囊由指向C末端单体-单体界面的箭头指示。插图突出关键单体单体(上部)和二聚体(下部)触点,带有相应的人和鼠GAC亚型残基编号(B类)WT GAC(红色)、D391K-GAC(蓝色)和K316E-D391K-R459E-GAC(绿色)的多角度光散射剖面,250μg(每个),其中实线表示通过监测折射率(R.I.)对每个物种进行洗脱,虚线表示当时洗脱物种的计算分子量。酶的单体、二聚体和四聚体形式的分子量的参考线分别包括在58、116和232 kDa。(C类)将200 nM WT QSY9-标记的GAC(红色)、二聚体QSY9-GAC(D391K)(蓝色)和单体QSY8-GAC(K316E、D391K、R459E)(绿色)添加到20 nM WT488-标记的GA中,进行FRET分析。(D类)968结合通过对WT 488标记的GAC、二聚体488-GAC(D391K)和单体GAC(K316E、D391K和R459E)(每个样品中总单体10 nM)的荧光猝灭进行监测。数据点代表三个独立实验的平均值(±SD),并与图3C类. (E类)50 nM(●)和5 nM WT GAC(○)的体外抑制曲线随着968浓度的增加而预先培养。数据点代表三个独立实验的平均值(±SD),并符合逻辑四参数曲线。重叠是968对Dbl诱导的病灶形成(三角形)的剂量依赖性抑制。

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