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EMBO J。2004年6月16日；23(12): 2440–2450.
2004年5月27日在线发布。 数字对象标识：10.1038/sj.emboj.7600258
预防性维修识别码：PMC423295型
PMID：15167898

Prospero维持胶质前体细胞的有丝分裂潜能，使其能够对神经元作出反应

瑞秋·L·格里菲斯1和艾丽西娅·伊达尔戈1,一
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

在中枢神经系统发育过程中，胶质细胞需要在正确的时间处于正确的数量和位置，以实现轴突引导和神经纤维形成。修复受损或患病的中枢神经系统需要操纵胶质前体，以便将胶质细胞的数量调节为神经元的数量，从而使轴突束得以重建、重髓鞘化和发挥功能。不幸的是，控制胶质前体增殖潜能的分子机制尚不清楚。我们在这里表明，胶质细胞增殖受与轴突的相互作用调节，并且果蝇基因繁荣是维持胶质细胞有丝分裂潜能所必需的。在生长锥引导期间，Prospero积极调节循环E促进细胞增殖。神经静脉激活Prospero水平最高的胶质细胞中的MAPKinase信号通路，将轴突延伸与胶质细胞增殖耦合。后来，Prospero通过激活Notch和拮抗p27/p21同源物Dacapo，使神经胶质前体保持未分化状态。这使繁荣-表达细胞在神经元消失后进一步分裂，并在发育过程中调节轴突的胶质细胞数量。

关键词：轴突导向，胶质细胞，少突胶质细胞，前体，Prospero

介绍

在发育过程中，需要调整不同相互作用细胞群中的细胞数量，以确保实现正确的器官结构、大小、形状和功能。在神经系统中，神经支配神经元的数量与靶区的大小相匹配，因为过多的神经元被凋亡所消除(汉堡和利维·蒙塔尔西尼，1949年). 类似地，胶质细胞的数量，如脊椎动物中枢神经系统（CNS）的少突胶质细胞，通过凋亡调节到可用轴突的体积，确保正确的髓鞘形成(Barres and Raff，1994年). 少突胶质细胞前体增殖还依赖于与轴突的相互作用和神经元功能，因为阻断电活动可使少突胶质增殖减少80%(巴雷斯和拉夫，1992年,1994). 事实上，要获得正常数量的细胞，需要在控制细胞存活和控制细胞增殖之间取得平衡。然而，实现这种平衡的机制尚不清楚。

在轴突引导过程中，胶质细胞必须在正确的时间处于正确的位置和数量，以组织轴突模式。胶质细胞在轴突引导过程中占据选择点位置，并触发轴突的束化和去束化决定(贝特，1976年;银色等, 1982;眼泪，1999;伊达尔戈和布斯，2000年). 一旦轴突轨迹建立，胶质细胞就维持轴突束、神经元存活和神经元完整性(展位等, 2000). 毫无疑问，胶质细胞的数量必须有限，才能出现这样复杂的结构。虽然已知神经元与胶质细胞的相互作用维持了这两种细胞类型的生存，但究竟是什么调节这些细胞如何分裂以获得正常的细胞数量仍然是一个谜。

修复受伤或患病的中枢神经系统将取决于恢复正确的胶质细胞数量。例如，将胶质细胞移植到脊髓损伤部位足以促进轴突和功能修复(拉蒙·库托等, 2000). 相反，胶质细胞数量的改变发生在胶质瘤、神经退行性疾病和损伤中(Fields和Stevens-Graham，2002年;富兰克林，2002;朱等, 2002). 治疗性恢复胶质细胞数量将需要定向操纵有丝分裂潜能和胶质前体的分化(拉蒙·库托等, 2000;富兰克林，2002;施瓦布，2002年). 有趣的是，脊椎动物成年中枢神经系统中有一群未成熟的少突胶质细胞，这些细胞可能是在需要时调整细胞数量的一种手段(ffrench-Constant和Raff，1986年;努涅斯等, 2003). 不幸的是，目前尚不清楚是什么使少突胶质前体细胞保持不成熟、增殖状态。

The longitudinal glia (LG) of the果蝇中枢神经系统与脊椎动物少突胶质前体细胞有一些共同特征。与少突胶质细胞一样，LG也会过量生成，多余的细胞会通过凋亡被清除。两种少突胶质细胞的存活(拉夫等, 1993)以及至少一些LG(伊达尔戈等, 2001)取决于与轴突的接触和神经调节蛋白/静脉。也有证据表明LG的扩散可能受到非自主控制。LG起源于节段性重复的纵向胶质母细胞（LGB）。LGB的DiI标记产生数量可变的子代细胞克隆，产生7到10个子代细胞(施密特等, 1997). 正常胚胎中该谱系中最多有三个细胞发生凋亡(伊达尔戈等, 2001)也就是说，如果LG血统的后代全部存活下来，其后代可能大约有12个细胞。这表明LGB谱系的有丝分裂剖面不仅是对称的，而且/或者LG前体分裂可能受到非自主控制。

在这里，我们分析了LG与先锋轴突相互作用时调节其增殖的机制。我们发现LG的增殖受神经元的调节，并且该基因繁荣(赞成的意见)在连接胶质细胞增殖和轴突导向方面起着关键作用。在早期，Pros能够促进胶质细胞增殖，以响应先驱神经元。一旦轴突束形成，Pros将神经胶质前体维持在一个停滞、不成熟的状态赞成的意见-表达细胞在神经元消失后进一步分裂。

结果

轴突引导期间LG分裂

在这里，我们从LG前体在轴突引导过程中与神经元相互作用的时间来分析调节LG前体增殖的机制。

在野生型胚胎中，LGB位于神经外胚层的边缘，它分裂，LG子代内陷并向中线迁移。当LG到达先驱神经元时，它们停止向内侧迁移，与延伸的轴突一起向前后方向迁移(伊达尔戈和布斯，2000年). LGB在神经元接触前生成，最多四个子代细胞，但在轴突引导期间，LG接触轴突时发生大多数LG分裂（第13阶段）。

我们通过共定位抗pHistone-H3和抗Repo抗体来监测LG增殖(图1D、E、H和L)或细胞质LG谱系报告基因lacZ（F263）(雅各布斯等, 1989) (图1C、G和I)或在htlGAL4启动子的控制下表达组蛋白YFP的抗GFP抗体(图1J和K). 我们之前已经证明htlGAL4的表达仅限于CNS中的LG(伊达尔戈等, 2001). 在第一个时间点，当dMP2先锋轴突开始向LG延伸时，四个LG细胞中的两个首先分裂(图1C和G)，总共有六个细胞。接下来，下降和上升的先锋轴突汇合成束状，形成第一个单一的纵向束(伊达尔戈和布兰德，1997年). 就在这些之后，轴突相遇，如FTZNGAL4驱动的GAP-GFP或22c10抗体所示，LG在束间接触点分裂(图1H–J). 最常见的情况是，六个LG星系团的两个后部接着分裂(图1I和J)，并且子细胞随着延伸的轴突迁移。由此产生的LG触发了第一个束簇的去束化，使其变成两个束簇(图1K) (伊达尔戈和布斯，2000年). LG分裂再次出现在这些分支上(图1E和L). 由此产生的LG触发轴突束最终分布成三个主要束，这是胚胎发育末期的特征(伊达尔戈和布斯，2000年)（另请参见图2J). 由于LG是所有这些轴突导向和束簇活动所必需的，LG增殖和轴突导向的协调确保LG的数量正确，以形成轴突模式。这就提出了一个问题，即轴突是否在引导过程中调节LG增殖。

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轴突引导期间LG分裂。(A、 B、F类)用（A）BP102（棕色）和抗Pros（黑色）显示的第16期胚胎神经胶质；（B） 反Pros，标记LG子集；（F） LG-LacZ报告中的FasII（轴突，绿色）和抗β-半乳糖（红色）。(C–L)用htlGAL4/UASHistone YFP（黄色）中的（C，D，E，G，H，I，L）抗pHistone-H3（蓝色）和（J，K）抗GFP观察LG增殖；LG（红色）可视化为：lacZ报告中的（C，G，I）抗βgal；（D，E，H，L）抗回购和（J，K）抗GFP（黄色）。轴突（绿色）用（G，I，J，K）22c10和（H，L）FTZNGAL4/UAS GAPGFP可视化。（C–E）分别是（G，H，L）的较低放大倍数视图。（G） 两个前LG（箭头）在后LG（空箭头）之前分开。在（H–L）中，箭头表示划分LG。（A，F）显示一段，（B–E）三段，（G–L）一个半段。中线向左，前面朝上。

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LG中的有丝分裂和Pros分布。(A–E)LG在LG-lacZ中用抗βgal（红色）显示，在野生型中用抗pHistone-H3（蓝色）和抗Pros（绿色）显示有丝分裂，但（D）除外，其中轴突用22c10（绿色）表示。(F–H（飞行高度）)（A–C）的单通道图像分别只显示反Pros。(我)用HRP可视化的抗-Pros。（A，F）两个前部LG具有较高的Pros级别（箭头）。（B，G）当细胞退出有丝分裂时，它们下调Pros（箭头）。（D） 当细胞退出有丝分裂时，它们随轴突（箭头）迁移。在（I）中，箭头表示LG分裂，白色箭头表示Pros水平较低的细胞，向后迁移。（E） 阶段15-17：无LG分裂，6/10 LG中存在Pros（箭头表示非Pros LG，空箭头表示凋亡LG）。(J型)图示轴突引导和束化期间胶质细胞增殖（如图1G–L)在一段时间内。（A–I）显示一个半段，中线位于左侧，前面向上。

我们仅使用LG-lacZ和抗pHistone-H3抗体可视化有丝分裂，验证了LGlioblast谱系中的有丝分裂特征(图2A-E). 我们证实了每个四细胞簇中最前面的两个细胞最先分裂(图2A). 由此产生的六个LG立即再次异步分裂，在轴突接触期间，一到五个LG可以同时分裂(图2B-D). 当细胞退出有丝分裂时，它们随轴突迁移(图2D和I). 后来，随着神经丛的形成，LG覆盖在轴突上，野生型LG细胞没有分裂（第15阶段；图2E). 这一特征表明LG增殖可能受与轴突的相互作用调节。

LG前体细胞的增殖受神经元的调节

为了解决这种可能性，我们测试了消除神经元是否会影响LG增殖。我们通过用FTZNGAL4进行靶向基因消融来消除神经元，FTZNGAL4驱动先驱神经元和其他神经元的表达(伊达尔戈和布兰德，1997年) (图3C). 尽管该驱动因子在胶质母细胞谱系中的表达非常短暂，但我们之前已经证明，当用于基因消融时，该驱动因子不会杀死纵向胶质细胞(金拉德等, 2001). 我们用抗Htl抗体染色的LG中的pHistone-H3抗体监测有丝分裂。当LG前体细胞通常在神经元接触时分裂时，靶向神经元消融导致LG有丝分裂减少，而当LG在野生型胚胎中不分裂时，分裂增加(图3A).

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神经细胞消融引起的胶质细胞增殖变化。(一)在用抗βgal或抗Htl染色的LG-LacZ苍蝇中，用抗磷酸化H istone-H3抗体监测LG中的有丝分裂（参见插图，用HRP染色的抗pHistone H3示例）。与野生型相比，消融胚胎LG中pHistone-H3半片段的定量：在第13阶段减少(P（P）<0.0005），在第15-16阶段轻度增加。插图显示，在切除胚胎的第15阶段，有丝分裂LG（pHistone-H3，棕色）聚集在一起。(B类)神经元消融后5-7个阳性LG半节段的量化，与野生型相比，只有4个或更少(P（P）<0.0005），与野生型相比，消融后8个阳性LG(P（P）<0.0005). 参见（D–F）了解定量抗Pros-stated片段的示例。(C类)表达由FTZNGAL4驱动，如UASGAPGFP（抗GFP）所示。(D–F型)在第16阶段，LG被抗Heartless（红色）和抗Pros（绿色）染色：（D）野生型片段有5-7个阳性LG；神经元消融后，这些值减少为四个阳性LG（E，箭头）或增加到15（F，箭头，这里增加到9）。（D–F）显示一段，前向上。蓝色是TOTO-3核染色。n个=半节段的数量。

我们之前已经证明，靶向性神经元消融也会诱导胶质细胞凋亡，而维持LG存活的一个神经元信号是先锋神经元产生的神经调节蛋白静脉(伊达尔戈等, 2001). 为了测试静脉是否也调节胶质细胞增殖，我们用pHistone-H3监测LG增殖的程度静脉突变体在轴突引导期间（13/14期），我们发现LG增殖减少(图4K). 通过用pHistone-H3监测细胞增殖，我们确认pHistone-H3斑点的减少对应于细胞增殖的减少，而不是细胞丢失静脉通过靶向表达LG中的p35阻止胶质细胞凋亡的突变体(图4K). 在这些胚胎中，与野生型相比，LG增殖仍然减少。这意味着静脉促进LG的EGF受体反应亚群的存活和增殖。

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Pros促进轴突接触后LG细胞增殖。在所有图像中，LG-Lacz苍蝇中的LG细胞质被显示为抗β-半乳糖（红色）。(A、 B、E、F)（A）野生型LG核用抗Repo（绿色）可视化；（B）赞成的意见突变体；（E） 野生型和（F）赞成的意见突变体。（A，B）是状态12，（E，F）是阶段15。(C、 D、G–I类)第12阶段的抗CycE（绿色）：（C）野生型；（D）赞成的意见突变体。（G-I）第13阶段：（G）野生型；（H）赞成的意见突变体；（一） 表达胚胎赞成的意见在所有LG中(htlGAL4；F263/U斯普罗斯). 在灰度中分别是（H，I）的单通道视图，仅显示反循环E。(J型)循环E突变胚胎：LG显示为抗心脏病（红色），细胞核显示为抗Repo（绿色）。(K（K）)LG中pHistone-H3的定量（抗βgal）：在第13阶段减少赞成的意见和在静脉突变体（计划比较，赞成的意见与野生型相比，P（P）<0.0005). 有丝分裂也减少vn（虚拟网络）表达突变体第35页(vn（虚拟网络）γ4htlGAL4/UAS p35 vnγ3). 15-16期胶质细胞增殖的增加在赞成的意见突变背景。(五十、 M（M）)显示（L）野生型和（M）野生型LG有丝分裂剖面的图表赞成的意见四细胞期后的突变体。垂直线表示LG接触轴突的时间。蓝色是核染色TOTO-3。所有图像均为一个半节段，中线位于左侧，前部向上。n个=半肢的数量。

胚胎发育结束时，当LG覆盖CNS的纵向轴突束时，赞成的意见以每半段约10 LG中的六个表示(图1B和2E)在连合轴突和纵向轴突的交叉点，即轴突接触最高的位置(图1A). 当我们用抗Pros抗体和抗Htl抗体对神经元消融后的LG进行可视化时，我们观察到阳性LG从6个减少到4个(图3B、D和E)而积极LG的过度使用频率较低，达到15(图3B和F). 有趣的是，我们只观察到LG在那些表达赞成的意见.

上述数据表明，在正常胚胎中，神经元在生长锥引导过程中促进胶质细胞分裂，在神经核形成时停止胶质细胞分裂。

Pros在LG中表达，反映有丝分裂的轮廓

Pros是一种DNA结合蛋白，在成神经细胞的不对称分裂中被称为细胞命运决定因子(雌鹿等, 1991;维辛等, 1991;平田等, 1995;2001年1月和1月)但从轴突接触时起，LGlioblast明显对称和异步分裂(图2A-E). 为了确定Pros在LG中可能扮演的角色，我们观察了赞成的意见LG血统。Pros分布在四个LG中，前两个LG具有更高的Pros水平，并且通常首先划分(图2A和F). 所有产生的六个LG中都存在优点，它们再次异步划分(图2B、C、G和H). 每次除法后，赞成的意见分离到两个子细胞，但在随轴突迁移的子细胞中，当细胞退出有丝分裂时，它被下调(图2D和I). 此后（第15阶段），Pros保持在10个LG中最前面的6个(图2E)在正常胚胎中不会进一步分裂(图2J). 这一侧面提出了三个问题：（1）为什么在胶质细胞接触轴突时Pros的水平不相等？（2） 为什么专业人士出现在所有划分的LG中？以及（3）为什么在LG不再分裂的时候，Pros只出现在LG的一个子集中？

Pros在生长锥引导期间促进LG中的细胞增殖

由于在所有划分LG的公司中都发现了Pros，我们想知道是否赞成的意见突变可能影响LG增殖。我们监测了赞成的意见携带LG lacZ报告子的果蝇中，pHistone-H3对LG增殖的突变，以及抗Repo抗体对细胞数量的影响。在赞成的意见突变体，神经元接触前LG数量增加（3.8%，n个=106;图4B)LG数量减少（38%，n个=108;图4F)和有丝分裂(图4K)神经元接触后（13期）。LG的最终数量赞成的意见突变体是正常的10–12的八倍，10–12延伸到轴突的范围，但不会进一步分裂。因此，在赞成的意见突变体，LG的有丝分裂轮廓从轴突引导期间的4–6–12变为更早的4–8(图4L和M). 这表明需要Pros来确定LG细胞分裂的轮廓和时间。

为了测试Pros对细胞分裂是否必要，我们观察了周期E(循环E)-导致G1相位转换为S相位赞成的意见突变胚胎。在野生型胚胎中，在四细胞期，CycE存在于所有四个LG中(图4C)随后在4/6 LG(图4G). 在赞成的意见突变体，在神经元接触之前，在异常的大LG簇中存在残余的CycE(图4D)神经元接触后无CycE(图4H)与此阶段细胞分裂下降相关(图4K). 在循环E合子突变体(索尔等, 1995)，细胞分裂不超过四细胞期（87.5%，n个=176;图4J)表明从四细胞阶段循环E调控受合子基因表达的控制。这些数据表明，Pros积极调节循环E从四细胞阶段开始。这也表明赞成的意见突变体LG在神经元接触跳过G1期之前分裂更快，四细胞期对应于LGlioblast谱系中的第一个G1期。

当四个LG接触神经元时，其中两个具有更高的Pros水平(图2A和F). 为了测试Pros水平是否影响LG细胞增殖，我们表达了Pros(曼宁和多伊，1999年)在所有LG中使用htlGAL4。我们发现赞成的意见在所有LG中，从四细胞阶段开始抑制循环E表达式(图4I)导致有丝分裂减少(图4K)最终LG数字为6。这意味着专业水平会影响LG的扩散。

两个Pros水平较高的前壁细胞表达EGF受体，该受体通过Ras/MAPKinase途径发出信号(伊达尔戈等, 2001). 这两个细胞中的抗dpERK抗体可以显示该途径的激活(图5A-C). 在赞成的意见突变体，dpERK未激活（85%，n个=20;图5D). 因此，在赞成的意见突变体，EGFR/dpERK依赖的细胞分裂缺失。在正常胚胎中，当神经元信号分子Vein与EGFR结合时，LG中的MAP激酶途径被激活(伊达尔戈等, 2001). 如上所示，缺乏静脉的突变体LG细胞分裂减少(图4K). 这表明高Pros水平正向调节两个LG的EGFR/MAPKinase途径，这使得这些LG只对静脉作出反应。

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LG中ERK未激活赞成的意见突变体。LG-lacZ用抗βgal（红色）可视化。(A、 B类)野生型：（A）两个细胞中高水平的反Pros（绿色、白色箭头），后面两个细胞低水平（空箭头）；（B） 仅显示反Pros的单通道视图。(C、 D类)抗dpERK（绿色，箭头）在两个具有较高Pros级别的LG中：（C）在野生型中；（D） 在中未检测到dpERK（箭头表示第12级LG的较大簇）赞成的意见突变体。(E类)dpERK（深绿色）在阳性LG（绿色）中的分离示意图。所有图像代表一个半节段，蓝色为TOTO-3，中线位于左侧，前部朝上。

Pros使LG前体在成熟神经丛中保持增殖状态

前突变体显示，从第13阶段开始，由于失去循环E表达和dpERK信号，意味着Pros促进细胞增殖。然而，有两个观察结果质疑这是否是Pros促进细胞增殖的唯一方式：首先，为什么Pros在没有LG野生型分裂的时候仍然存在？第二，为什么神经元消融后LG的过度增殖只在阳性LG中诱导？

为了研究六个阳性LG是否在其他方面与其他LG不同，我们搜索了这些细胞中表达的其他基因。我们发现Notch在表达Pros的同一LG中高水平表达，在表达Pros-negative的后部LG中低水平表达(图6A). 此外，Notch在赞成的意见突变胚胎，表明Pros正调控这些细胞中Notch的表达(图6B). 因为Notch在其他情况下被认为是增殖和干细胞状态的促进剂(仁（Hitoshi）等, 2002)这表明阳性LG可能处于与阴性细胞不同的增殖状态。

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Pros通过控制G1期阻滞维持LG前体细胞增殖。LG-lacZ用抗βgal可视化(A–G)红色；(高-低)蓝色。（A） 野生型（阶段14）、单通道和合并图像中的反缺口（绿色）。（B） 在中检测不到防缺口（绿色）赞成的意见突变胚胎。（C） 激活的表达式槽口LG导致所有LG中的Pros上调（反Pros，绿色）(htlGAL4；F263/UAS诺丁特拉). （D） 的表达式麻木的LG导致所有LG中Pros的下调，最前面的两个除外（箭头、反Pros、绿色）(htlGAL4；F263/UASnumb号). （E） 一个LG（阶段14）中的反循环（绿色）。（F） 一个LG中的Anti-CycA（绿色）（阶段14）。（G） 第15阶段LG中无抗CycB（绿色）。（E，F，G）的单通道视图仅显示自行车。（H–M）在表达循环ELG中：（H）控制（F263）：无BrdU合并；（一） 控制表达循环E在LG中(htlG4；F263/UAScycE公司); （J） LG中的胚胎表达循环E和凹口-英寸(htlG4；F263/UAScycE UASNotch-intra公司)显示1.5个半节；（K） 胚胎在LG中的表达麻木的和循环E(htlG4；F263/UAScycE阿联酋). （左）赞成的意见突变体表达循环E在LG中(htlG4；F263专业人士-/UAScycE专业人士-). (M（M）)BrdU合并的量化。与UAScycE对照组相比，在（1）没有BrdU的情况下，半段的频率增加赞成的意见突变体（计划比较，P（P）<0.0005），（2）表达UASNumb时，仅有1–2 LG的BrdU（计划比较，P（P）<0.005），（3）表达UASNotch-intra时，BrdU in>7 LG。表达UASNumb时，3-6 LG中带有BrdU的半段的频率降低（计划比较，P（P）<0.0005). (N个)总结图，野生型显示了G1期停滞的六个LG（蓝色）和G0期的剩余LG，以及BrdU（橙色，即S期细胞，S）在上述照片中显示的实验中的掺入。在（A–G）中，蓝色为TOTO-3。所有图像显示一个半段，中线位于左侧，前部向上；n个=半肢的数量。

为了确定Pros-LG与Pros-阴性LG是否具有不同的有丝分裂潜能，我们首先询问LG是否在胚胎发育结束时退出了细胞周期。在野生型胚胎发生结束时，LG没有分裂，这意味着这些细胞要么退出了细胞周期，要么处于细胞周期停滞状态。我们最后在胚胎发育中期（14期；图6E和F）也没有CycB(图6G)也不是pHistone-H3(图2E)LG从第15阶段开始。因此，在此阶段，LG不处于G1/S过渡、S相或M相。它们不包含BrdU(图6H); 因此，LG没有经历S阶段，也没有在G2中被捕。因此，在胚胎发育结束时，在轴突引导后，LG要么被阻滞在G1期，要么已经退出细胞周期并处于G0期。当神经元被切除时，LG在此阶段会过度增殖(图3A、B和F); 因此，至少有一些LG在G1中被捕。然而，当神经元被切除时赞成的意见突变胚胎，未诱导LG过度增殖(图4K). 因此，LG需要Pros来分裂以应对神经元消融，这表明Pros维持LG在G1期的阻滞。

那么Pros控制了G1期阻滞和G0期细胞周期退出之间的区别吗？以下证据表明，阳性LG前体处于G1期阻滞，并保留有丝分裂潜能。14期野生型胚胎中没有BrdU的掺入，正常胚胎中LG从此不再分裂(图6H、M和N). 然而，如果我们表示循环E在所有带有htlGAL4的LG中，每个半段最多有6个细胞含有BrdU(图6I、M和N). 因此，有6个细胞被阻滞在G1期，并且在靶向表达循环E。如果我们触发赞成的意见在所有LG中，通过将Notch-intra与循环E（Notch积极调节赞成的意见表达；图6C)，每半段最多9个细胞含有BrdU(图6J、M和N). 相反，当我们表达麻木的LG的外胚层，导致赞成的意见除了两个LG(图6D)，连同循环E，BrdU掺入量下降，可能仅限于在这些胚胎中保留Pros的两个LG(图6K、M和N). 在赞成的意见突变胚胎，LG不掺入BrdU，尽管异位表达循环E(图6L、M和N). 因此，在没有Pros的情况下，CycE无法推动细胞通过G1/S转变。这表明没有Pros的细胞退出细胞周期并处于G0分化状态，而具有Pros的是具有有丝分裂潜能的G1前体细胞。

Pros通过对抗Dacapo防止LG中的细胞周期退出

Dacapo（Dap）是果蝇细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21/p27同源物及其促进细胞周期退出(德努伊等, 1996;车道等, 1996). 在脊椎动物中，p27促进少突胶质前体细胞的细胞周期退出(卡萨西亚·邦菲尔等, 1997;杜兰德等, 1997,1998). 因此，我们询问Pros是否可以通过调节dap公司。

在神经元接触后的正常细胞增殖过程中，LG获得两种不同的形态：前细胞比后LG更圆(图7A). 前部细胞是分裂的Pros阳性细胞，而后部细胞是下调Pros的LG。后来，所有LG都展开了(图7B). 在赞成的意见突变体，所有LG都有大的细胞质投射(图7C)，表示分化。什么时候？赞成的意见以所有LG表示，它们四舍五入(图7D)，表示分化不完全。在dap公司突变体，LG是圆形的(图7E)，当所有LG快递dap公司它们形成广泛的细胞质投射(图7F). 此外，在dap公司突变体，胶质分化标记Repo减少或丢失（19%，n个=226;图7G和M）并且在野生型中没有LG分裂时存在过量的有丝分裂（15.4%，n个=208（第15阶段）。这表明Pros阻止了LG的完全差异化，而Dap则促进了这种差异化。

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Pros和Dap在LG中相互对抗。(A–F)LG（抗β-半乳糖，蓝色）in：（A）第13阶段的野生型（黑色箭头，Pros-LG；空箭头，非Pros LG）和（B）第16阶段（箭头表示投影）；（C）赞成的意见突变体（如（B）中的箭头）；（D）htlGAL4；F263/UASpros；（E）dap公司突变体（箭头指向圆形细胞）；（F）htlGAL4；F263/UASdap型（箭头表示投影）；（B–F），所有阶段16。(G–L)红色LG（反βgal）：（G）回购（绿色，箭头表示损失）dap公司突变体；（H） 野生型抗-Pros（绿色）；（一） 野生型抗Dap（绿色，箭头）；（J） 反Pros（绿色，箭头）indap公司突变体；（K） 反Pros（绿色）在中被下调（箭头）htlGAL4；F263/UASdap型胚胎（注意左侧效果较弱，箭头为空）；（五十） 中没有防Dap（绿色）（箭头）htlGAL4；F263/UASpros公司胚胎。(M–R（M–R）)（G–L）的单通道图像分别显示反回购、反专业和反Dap。除（K）外，所有图像均显示一个半节段，该半节段中线位于左侧，前部向上。

Dap在不表达赞成的意见(图7H、I、N和O). 在dap公司突变体，Pros可在所有LG中找到（32.4%，n个=34;图7J和P)，而表达式dap公司在所有LG下调Pros（14.5%，n个=234;图7K和Q). 相反，表示赞成的意见在所有LG预防中dap公司表达式(图7L和R). 因此，在LG中，Pros和Dap的表达和功能是互补和互斥的。我们的结果表明，Dap促进细胞周期退出和不表达赞成的意见Pros通过拮抗Dap使LG前体保持在未成熟状态，具有有丝分裂潜能。

讨论

我们已经证明，在轴突引导期间，神经元-胶质细胞相互作用调节LG增殖(图8A). 随着轴突的延伸，神经元促进LG分裂；然而，一旦轴突束成熟，神经元就会阻止LG增殖。我们已经证明，Pros是LG中的关键调节器，能够实现LG对神经元的双重反应。

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总结图表，以说明Pros在控制LG增殖中的功能。Pros LG为绿色，高水平Pros为深绿色，Pros负LG为蓝色。(一)野生型；(B类)神经元消融后。

我们已经发现Pros在促进细胞增殖和防止细胞周期退出方面的新作用。我们已经证明，当细胞分裂停止一段时间后，胶质细胞在四个细胞簇中到达延伸的生长锥。通常情况下，这些LG中的两个会相除，总共会有六个，然后再相除，但由于一些LG死亡，实际的最终数字在8到11个单元格之间。在赞成的意见突变体，胶质细胞接触8个细胞簇中的先驱神经元，而不是正常的4个细胞簇，这表明LG在母体CycE存在时分裂得比正常情况更快，跳过了G1期。四个LG分裂成六个LG的过程也被遗漏了，因此有丝分裂模式从正常的4-6-12变成了4-8。

损失赞成的意见功能导致LG增殖减少，表现为三种方式：（1）in赞成的意见突变体，两个具有最高Pros水平的前LG的第一次分裂丢失，因为没有dpERK赞成的意见突变体，因为没有赞成的意见未生成CycE。因此，尽管LG早在赞成的意见突变体，这些分裂与轴突导向分离。因此，Pros将LG中的有丝分裂模式从简单的对称模式改变为LG对传入轴突作出反应的模式。（3） 在没有Pros的情况下，当神经元被切除时，LG没有过度增殖的潜力。

Pros蛋白存在于所有分裂LG和保留有丝分裂潜能的LG中。在生长锥引导和轴突束化过程中，Pros促进两个LG的LG增殖，这两个LG-能够对静脉作出反应并激活MAPKinase途径。静脉诱导两个DER阳性LG的LG细胞分裂和细胞存活。靶向RNAi敲低MP2神经元的静脉功能仅足以导致LG凋亡(伊达尔戈等, 2001). 我们在这里已经表明，基因缺失胚胎中静脉功能的丧失会减少有丝分裂，也会在细胞凋亡受阻时减少。因此，EGFR/MAPKinase信号通路控制这两个LG中的细胞存活和细胞增殖。EGFR还控制视网膜中的细胞存活和细胞增殖，以响应配体Spitz(Baker和Yu，2001年). 后来，当轴突束形成时，Pros通过阻止它们退出细胞周期来维持LG中的有丝分裂电位。事实上，只有阳性LG在异位表达循环E。这样，在胚胎发育结束时，LG被分为阳性G1受体LG和阴性LG，它们已退出细胞周期并处于G0。Pros通过积极调节Notch和拮抗Dacapo，将LG维持在G1-受体未分化、未成熟的前体状态。

专业人士在LG部门的新角色

我们对Pros在轴突引导期间在LG中的作用的研究结果与其成神经细胞功能不同。在成神经细胞谱系中，Pros蛋白位于新月形细胞中，在神经细胞分裂时不对称地分布到子细胞。在神经节母细胞中，Pros被内化到细胞核中，决定细胞命运并限制细胞分裂(2001年1月和1月). 然而，LGlioblast的后代在接触先驱轴突时（四细胞期）分裂明显对称，尽管是异步的。在这些分裂中，Pros出现在所有分裂LG的细胞核中，而不是新月形。在细胞分裂时，Pros与两个子细胞对称分离，在细胞分裂后随着后部LG随轴突迁移而下调。最后，在轴突引导期间，赞成的意见突变导致LG增殖减少，而不是过度，这意味着赞成的意见是进行细胞分裂所必需的。

Pros及其脊椎动物同源物Prox1可抑制细胞增殖并促进细胞周期退出(维格勒等, 1999;Li和Vaessin，2000年;染料等, 2003). 事实上，两者都在赞成的意见和探头1突变体、细胞增殖和细胞周期蛋白增加，Prox1和Pros都可以促进第27页/dap表达式。我们已经证明，LG-Pros可以促进细胞增殖，并通过对抗Dap阻止细胞周期退出。因此，Pros在不同的细胞环境中以不同的方式控制细胞周期基因。此外，时间监管至关重要线路接口单元等(2002)已经表明，Pros既可以促进也可以对抗dap公司不同时间点的表达。我们也像其他人一样观察(Li和Vaessin，2000年;染料等, 2003)宫外孕时赞成的意见表达LG除法少且不表达循环E然而，在LG中，这可能不是由于促进了细胞周期退出，而是由于细胞周期阻滞中的前体提前停止。

我们的发现也与Pros在混合神经胶质母细胞谱系中的作用形成了对比，在混合神经胶质母细胞谱系中，Pros与将成为神经胶质细胞的子细胞不对称分离(高等, 1999;秋山奥达等, 2000;Freeman和Doe，2000年). LG是一个纯胶质血统。在LG中，Pros可能控制两个Pros水平较高的LG的命运，这两个LG通过MAPKinase/dpERK发出信号。我们的结果表明，在轴突引导期间，Pros在维持增殖和不确定状态中起主要作用。

细胞数量调节的时间和可塑性

我们对胶质细胞增殖的非自主调节的发现与之前的工作形成了对比，之前的工作设想了一种由谱系特性决定的细胞自主增殖模式。因此，LGB将以简单的对称方式分裂为2–4–8个细胞(巴登霍斯特，2001). 这一结论是基于四个Repo阳性细胞中含有BrdU的发现。我们的数据表明，将BrdU并入四个LG代表了LG血统中的一个狭窄时间窗口，而不是最终的划分。事实上，我们在同一阶段检测到多达五个LG的有丝分裂。

不同LG配置文件的发现具有重要意义。这意味着LG的最终数量不是固定在8个电池，而是在8到11个之间变化，这取决于LG的死亡人数。通过简单的对称分裂可以更快地实现最终固定数量的8个LG，而不会对最终胶质细胞质量产生重大影响。事实上，在Pros突变体中，最终数量的8细胞是在较早的时间点实现的，这8个细胞伸展开来占据节段神经丛的整个长度。然而，LG数量的连续增加和调整在轴突模式的连续步骤中部署了有限数量的LG。这使得胶质细胞在离散的时间点处于正确的数量，从而实现轴突引导和束化。

生长锥引导的第一个事件发生在四细胞阶段，此时LG停止分裂一段时间，等待先驱生长锥延伸。此时，LG处于谱系中的第一个G1阶段。G1期是细胞响应生长因子通过ERK发出信号的特征时间(Roovers和Assocan，2000年，#86），并且在视网膜中，轴突选择性地接近G1中的前体(塞勒克等, 1992). 随着生长锥的接近，四细胞簇的两个前部LG（Pros水平较高）会随着静脉而分裂。静脉由MP2先锋神经元产生，需要LG来引导轴突(伊达尔戈和布斯，2000年;伊达尔戈等, 2001). 通过调节细胞存活和细胞增殖，静脉确保LG以正确的数量存在，以实现生长锥引导。Pros调节LG中CycE的合子表达，从而引入第一个G1-S转变和EGFR信号细胞的命运。通过这种方式，Pros调节胶质细胞对神经元信号的反应时间以进行分裂。随后，在轴突发生束化和脱脂的时候，LG继续分裂。通过这种方式，LG以有限的数量部署，以便能够随着时间的推移对轴突进行分类。

随后，神经元阻止神经胶质细胞进一步增殖。因此，胶质细胞的数量是通过胶质细胞对神经元信号的双重反应来实现的：早期神经元促进胶质细胞增殖，后期阻止胶质细胞增殖。在后期阶段，Pros通过保持LG的一个子集处于未分化状态来赋予发育可塑性，因为G1抑制的LG可以调节细胞数量。这使轴突束在发育过程中的建立具有稳健性。

通过调节G1期阻滞，Pros可以在胶质细胞中实现修复样反应

我们发现Pros促进G1期阻滞，阻止LG前体的细胞周期退出和终末分化，并保持其处于未成熟状态，具有有丝分裂潜能。在变态过程中，正性LG可能是唯一进一步分裂的LG，在重组神经核形成成人中枢神经系统的过程中。或者，Pros阳性LG构成了一个神经胶质前体群体，如果需要，例如在发育过程中发生的变化，对不同的环境条件或有限的损害做出反应时，具有进一步分裂的能力。

Pros将LG的一个子集维持在未成熟状态，使其能够在神经元被切除时进一步分裂(图8B). 神经元消融后LG增殖的增加类似于体内胶质细胞的修复样反应。在脊椎动物中，神经元损伤会导致有限的胶质细胞过度增殖和自发的髓鞘重分化(红酒和阿姆斯特朗，1998年;富兰克林，2002;米勒，2002). 中枢神经系统修复的治疗实施需要操纵少突胶质前体细胞，并控制其相对于再生轴突的数量。这需要了解与神经元接触相关的寡突胶质前体分化和增殖的控制因素。我们的结果表明，Pros在果蝇它邀请研究Prox1在少突胶质细胞前体增殖和分化中的作用。

成年哺乳动物的大脑有少突胶质前体细胞(ffrench Constant和Raff，1986年;努涅斯等, 2003)，就像dap公司诱导LG、p27和p21的细胞周期退出和末端分化诱导少突胶质前体细胞的细胞周期离开和末端分化(卡萨西亚·邦菲尔等, 1997;杜兰德等, 1998). 事实上，p27是细胞周期计时器的一部分，它限制少突胶质前体细胞分裂的次数(杜兰德和拉夫，2000年). 有趣的是，Notch保持了脊椎动物的干细胞状态(仁（Hitoshi）等, 2002)我们还发现Notch仅限于不成熟的LG前体。值得注意的是，Jagged1从视神经轴突激活少突胶质细胞前体中的Notch可防止少突胶质分化(王等, 1998). 也许Prox1可以通过调节Notch和拮抗p21和p27，将少突胶质前体细胞维持在未成熟状态。在中枢神经系统损伤或疾病时，Prox1可能是协调神经胶质细胞数量和轴突轨迹重建以实现修复的关键分子。

我们已经证明，Pros在引导和束化期间调节神经胶质细胞数量以适应延伸的轴突，以及保持神经胶质前体处于未分化状态，使其能够对神经元作出反应方面发挥着基本作用。这种相互作用机制为轴突轨迹的形成提供了稳健性，这对中枢神经系统在发育过程中的结构稳定性至关重要。我们发现Pros通过过度增殖使神经胶质细胞对神经元消融做出反应，这引发了对Pros潜在用途的进一步研究果蝇CNS用于修复研究。

材料和方法

苍蝇

使用报告者lacZ线F263可视化LG(雅各布斯等, 1989). 股票由传统遗传学产生，背景为F263。本研究使用了以下突变体：（1）prosJ013 F263/TM6BlacZ；（2） 脉γ3 F263/TM3lacZ；（3） 静脉γ4 F263/TM3lacZ(静脉突变胚胎反式-杂合子脉γ3 F263/脉γ4 F263）；（4） cycEAR95/CyolacZ；（5） dacapo04454/CyOlacZ；F263；（6） htlG4；F263 prosJ013/TM6BlacZ。使用htlGAL4从12.2期开始，在所有LG中使用GAL4驱动靶向异位表达；F263只苍蝇，与下游行驶的苍蝇交叉无人机以下基因：（1）w；UAS prospero；（2） w；无人机cycE；（3） w；UAS达卡波；（4） w；UAScycE UAS Notch-intra（即激活的Notch）；（5） w；UAS cycE UASnumb；（6） w；UAScycE prosJ013/TM6BlacZ公司。为了驱动异位表达循环E在里面赞成的意见突变体，使用以下子代胚胎：htlG4；F263 prosJ013/UAS cycE-专业J013。靶向性神经元消融(伊达尔戈等, 1995;伊达尔戈和布兰德，1997年)通过将驱动前驱神经元和其他神经元中GAL4表达的FTZNGAL4苍蝇与UASRicin A（UFR1.1）苍蝇的催化亚单位杂交进行。消融神经元赞成的意见突变胚，将以下砧木杂交：（1）FTZNGAL4 prosJ013/TM6BlacZ；（2） UFR1.1；F263 prosJ013/SM6aTM6B。用报告基因lacZ标记平衡染色体。

免疫组织化学

按照标准方案进行抗体染色(帕特尔，1994年)除用dpERK或抗-Dap染色的胚胎外，将其固定在8%甲醛中30分钟。抗体用以下稀释液进行荧光检测（用于HRP检测，一级抗体浓度减半）：兔抗βgal（Cappel）1:2500；兔抗回购1:100；小鼠抗Repo 1:10；鼠抗Pros 1:1；小鼠FasII 1:2；小鼠抗Notch-intra 1:10（C17.9C6）；兔抗pHistone-H3 1:300；兔抗无情1:500；小鼠抗dpERK 1:50（Sigma）；小鼠抗CyclinA 1:3；小鼠抗细胞周期蛋白B 1:3；小鼠抗CyclinE 1:1；鼠抗Dacapo 1:2。作为二级抗体，我们使用1:300的生物素化抗体（Jackson和Vector实验室），然后使用链霉亲和素Alexa 488、Alexa 594、Alexa 546和Alexa 660（1:250）或Elite试剂盒（Vector labs），或以1:250的比例直接偶联到Alexa 480、Alexas 546和Allexa 594（分子探针）。胚胎在1:1000的TOTO-3（分子探针）中在PBS中浸泡10分钟。

BrdU公司

脱蛋白后，胚胎在辛烷中浸泡8分钟，然后在25°C的PBS中的BrdU（1 mg/ml）/FdU（0.1 mg/ml）（Amersham Pharmacia）中培养1小时。随后立即将胚胎冲洗并固定在4%甲醛：庚烷1:1中20分钟。然后按照标准程序对胚胎进行其他抗体染色。随后，用50μg/ml的蛋白酶K在PBTritonX中处理胚胎1分钟和30秒，用2 mg/ml的甘氨酸在PBTritonX中停止反应。将胚胎再次固定在4%甲醛中，然后用10%的正常山羊血清和2%的BSA封闭胚胎，然后用抗BrdU抗体（抗BrdU，Amersham Pharmacia克隆BU-1，核酸酶）孵育2小时。在上述封闭溶液中用生物素化小鼠二级抗体清洗和孵育。

显微镜和成像

共聚焦显微镜使用BioRad 1024和Radiance 2000激光扫描共聚焦显微镜进行。使用Volocity（即兴）进行三维成像。

致谢

我们感谢J Drummond、I Robinson、J Heath和我们小组成员对手稿的建议、讨论和评论；J Fenton，技术援助；试剂：C Doe、C Goodman、I Hariharan、Iowa Hybridoma Bank、R Jacobs、J Knoblich、C Lehner、F Matsusaki、N Patel、H Richardson、K Saigo、A Travers和H Vaessin。RG持有BBSRC学生奖学金，AH持有威康信托CDF、MRC CEG和EMBO YIP。

工具书类

  • Akiyama-Oda Y、Hotta Y、Tsukita S、Oda H（2000）神经胶质细胞命运转换的机制果蝇胸神经母细胞6-4谱系.开发 127: 3513–3522 [公共医学][谷歌学者]
  • 巴登霍斯特P（2001）Tramtrack控制果蝇胚胎中枢神经系统.开发 128: 4093–4101 [公共医学][谷歌学者]
  • Baker NE，Yu S-Y（2001年）EGF受体定义细胞周期进展和存活的域，以调节发育中的细胞数量果蝇眼睛.单元格 104: 699–708 [公共医学][谷歌学者]
  • Barres BA，Raff M（1992年）少突胶质前体细胞的增殖依赖于轴突中的电活动.自然 361: 258–260 [公共医学][谷歌学者]
  • Barres BA，Raff MC（1994）发育中大鼠视神经少突胶质细胞数量的控制.神经元 12: 935–942 [公共医学][谷歌学者]
  • 贝特·CM（1976）昆虫胚胎中的先锋神经元.自然 260: 54–55 [公共医学][谷歌学者]
  • Hidalgo A，Kinrade E，G号展位（2000年）胶质细胞维持跟随神经元存活果蝇中枢神经系统.开发 127: 237–244 [公共医学][谷歌学者]
  • Casaccia-Bonnefil P、Tikoo R、Kiyokawa H、Friedrich V Jr、Chao MV、Koff A（1997）在缺乏细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27kip1的情况下，少突胶质细胞前体分化受到干扰.基因开发 11: 2335–2346[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • de Nooij JC、Letendre MA、Hariharan IK（1996）细胞周期素依赖性激酶抑制剂Dacapo对于在果蝇胚胎发生.单元格 87: 1237–1247 [公共医学][谷歌学者]
  • Doe CQ、Chu-La-Graff Q、Wright DM、Scott MP（1991）这个繁荣基因决定细胞在果蝇中枢神经系统.单元格 65: 451–464 [公共医学][谷歌学者]
  • Durand B、Fero ML、Roberts JM、Raff MC（1998）p27改变细胞对有丝分裂原的反应，是细胞内定时器的一部分，它可以阻止细胞周期并启动分化.当前生物 8: 431–440 [公共医学][谷歌学者]
  • Durand B、Gao F-B、Raff M（1997）细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27/Kip1的积累与少突胶质细胞分化的时间.欧洲工商管理硕士J 16: 306–317[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Durand B，Raff M（2000）一种在少突胶质细胞发育过程中运行的细胞固有计时器.生物学论文集 22: 64–71 [公共医学][谷歌学者]
  • Dyer MA、Livesey FJ、Cepko CL、Oliver G（2003）Prox1功能控制哺乳动物视网膜中的祖细胞增殖和水平细胞生成.自然基因 34: 53–58 [公共医学][谷歌学者]
  • ffrench-Constant C，Raff MC（1986）成年大鼠视神经中增殖的双能胶质前体细胞.自然 319: 499–502 [公共医学][谷歌学者]
  • Fields R，Stevens Graham B（2002）神经-神经沟通的新见解.科学类 298: 556–561[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Franklin RJM（2002）为什么多发性硬化症患者的髓鞘重建失败？ Nat Rev神经科学 三: 705–714 [公共医学][谷歌学者]
  • Freeman M，Doe CQ（2000年）不对称Prospero定位需要在果蝇中枢神经系统.开发 128: 4103–4112 [公共医学][谷歌学者]
  • Gho M、Bellaiche Y、Schweisguth F（1999）再次访问果蝇微小毛细胞谱系：一种新型的固有不对称细胞分裂产生胶质细胞.开发 126: 3573–3584 [公共医学][谷歌学者]
  • 汉堡五世，列维·蒙塔尔西尼RJ（1949）正常和实验条件下鸡胚脊神经节的增殖、分化和变性.J实验动物园 111: 457–502 [公共医学][谷歌学者]
  • 伊达尔戈A，GE展位（2000）胶质细胞决定前驱轴突在果蝇胚胎中枢神经系统.开发 127: 393–402 [公共医学][谷歌学者]
  • Hidalgo A，品牌AH（1997）靶向性神经元消融：先驱神经元在中枢神经系统的引导和束化中的作用果蝇.开发 124: 3253–3262 [公共医学][谷歌学者]
  • Hidalgo A、Kinrade EFV、Georgiou M（2001）这个果蝇神经调节蛋白静脉在中枢神经系统轴突引导期间维持胶质细胞存活.开发人员单元格 1: 679–690 [公共医学][谷歌学者]
  • Hidalgo A、Urban J、Brand AH（1995）靶向消融胶质细胞可破坏脑内轴突束的形成果蝇中枢神经系统.开发 121: 3703–3712 [公共医学][谷歌学者]
  • Hirata J、Nakagoshi H、Nabeshima Y、Matsuzaki F（1995）同源结构域蛋白Prospero在果蝇发展.自然 377: 627–630 [公共医学][谷歌学者]
  • Hitoshi S、Alexson T、Tropepe V、Donovil D、Elia AJ、Nye JS、Conlon RA、Mak TW、Bernstein A、van der Kooy D（2002）Notch通路分子对哺乳动物神经干细胞的维持而非生成至关重要.基因开发 16: 846–858[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Jacobs R、Hiromi Y、Patel NH、Goodman CS（1989）神经胶质细胞的谱系、迁移和形态发生果蝇分子谱系标记揭示的中枢神经系统.神经元 2: 1621–1635 [公共医学][谷歌学者]
  • 年1月、年1月（2001年）细胞不对称分裂果蝇神经系统.Nat Rev神经科学 2: 772–779 [公共医学][谷歌学者]
  • Kinrade EFV、Brates T、Tear G、Hidalgo A（2001）迂回信号、细胞接触和营养支持限制了果蝇中枢神经系统.开发 128: 207–216 [公共医学][谷歌学者]
  • Lane ME、Sauer K、Wallace K、Jan YN、Lehner CF、Vaessin H（1996）Dacapo是一种细胞周期素依赖性激酶抑制剂，在果蝇发展.单元格 87: 1225–1235 [公共医学][谷歌学者]
  • Li L、Vaessin H（2000）全神经Prospero终止细胞增殖果蝇神经发生.基因开发 14: 147–151[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Liu T-H，Li L，Vaessin H（2002年）的转录果蝇CK1基因dacapo由顺式-调控序列.机械开发 112: 25–36 [公共医学][谷歌学者]
  • Manning L，Doe CQ（1999）Prospero区分同胞细胞的命运，但没有在果蝇成人外感觉器官谱系.开发 126: 2063–2071 [公共医学][谷歌学者]
  • Miller RH（2002）脊椎动物中枢神经系统少突胶质细胞发育的调控.神经生物进展 67: 451–467 [公共医学][谷歌学者]
  • Nunes MC、Roy NS、Keyoung M、Goodman RR、McKhann G II、Jiang L、Kang J、Nedergaard M、Goldman SA（2003）成人大脑皮层下白质多潜能神经前体细胞的鉴定与分离.自然·医学 9: 439–447 [公共医学][谷歌学者]
  • Patel NH（1994）整体成像神经元亚群和其他细胞类型果蝇使用抗体探针的胚胎和幼虫.英寸黑腹果蝇：细胞和分子生物学的实际应用，Goldstein LSB，Fyrberg EA（编辑）第44卷，第446–485页。圣地亚哥：学术出版社[公共医学][谷歌学者]
  • Raff MC、Barres BA、Burne JF、Coles HS、Ishizaki Y、Jacobson MD（1993年）程序性细胞死亡与细胞存活控制：来自神经系统的经验教训.科学类 262: 695–700 [公共医学][谷歌学者]
  • Ramon-Cueto A、Cordero M、Santos-Benito F、Avila J（2000）嗅鞘神经胶质对截瘫大鼠功能恢复及脊髓运动轴突再生的影响.神经元 25: 425–435 [公共医学][谷歌学者]
  • Redwine J、Armstrong R（1998）体内表达PDGFalphaR的少突胶质细胞祖细胞在早期再髓鞘化过程中的增殖.神经生物学杂志 37: 413–428 [公共医学][谷歌学者]
  • Roovers K，Assoian RK（2000年）将MAP激酶信号整合到G1期细胞周期机制中.生物学论文集 22: 818–826 [公共医学][谷歌学者]
  • Sauer K、Knoblich JA、Richardson H、Lehner CF（1995）细胞周期蛋白E/cdc2激酶调节和S期控制在有丝分裂和内复制周期中的不同模式果蝇胚胎发生.基因开发 9: 1327–1339 [公共医学][谷歌学者]
  • Schmidt H、Rickert C、Bossing T、Vef O、Urban J、Technau GM（1997）胚胎中枢神经系统谱系黑腹果蝇二、。来源于神经外胚层背部的成神经细胞谱系.求文献一篇 189: 186–204 [公共医学][谷歌学者]
  • 施瓦布ME（2002）修复受伤的脊髓.科学类 295: 1029–1031 [公共医学][谷歌学者]
  • Selleck SB、Gonzalez C、Glover DM、White K（1992）轴突长入对胚胎后神经元前体G1-S转换的调节.自然 355: 253–255 [公共医学][谷歌学者]
  • Silver J、Lorenz SE、Wahlstein D、Coughlin J（1982）大脑大连合发育过程中的轴突引导：描述性和实验研究体内预成胶质通路的作用.《计算机神经学杂志》 210: 10–29 [公共医学][谷歌学者]
  • 眼泪G（1999）神经引导：遗传学视角.趋势Genet 15: 113–118 [公共医学][谷歌学者]
  • Vaessin H、Grell E、Wolff E、Bier E、Jan LY、Jan YN（1991）繁荣在神经元前体中表达并编码一种核蛋白，该核蛋白参与控制轴突的生长果蝇.单元格 67: 941–953 [公共医学][谷歌学者]
  • Wang S、Sdrulla AD、diSibio G、Bush G、Nofsiger D（1998）Notch受体激活抑制少突胶质细胞分化.神经元 21: 63–75 [公共医学][谷歌学者]
  • Wigle JT、Chowdhury K、Gruss P、Oliver G（1999）Prox1功能对小鼠晶状体纤维伸长至关重要.自然基因 21: 318–322 [公共医学][谷歌学者]
  • Zhu Y、Ghosh P、Charnay P、Burns DK、Parada LF（2002）NF1中的神经纤维瘤：雪旺细胞起源和肿瘤环境的作用.科学类 296: 920–922[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
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