图7

（A）GLS2级启动子激活Huh1和Huh7细胞中的荧光素酶报告载体。左侧面板：控制荧光素酶报告载体（Con-Luc）和包含GLS2级启动子区（GLS2-Luc）。对照报告者的相对荧光素酶活性指定为1。（B） HpaII消化显示pGL2-GLS2报告载体完全甲基化。载体被M。新加坡证券交易所I或模拟甲基化物用Hpall消化并在琼脂糖凝胶上分离。（C） 甲基化GLS2级启动子降低了Huh1和Huh7细胞中报告载体的荧光素酶活性。左面板：含有甲基化或模拟甲基化的非甲基化pGL2荧光素酶报告载体的示意图GLS2级发起人。甲基化报告载体的相对荧光素酶活性GLS2级启动子被指定为1。（D） 5-Aza-dC减少甲基化GLS2级MSP检测HCC细胞中的启动子。用5-Aza-dC（5μM）或DMSO处理细胞7天。U： 非甲基化特异性引物PCR；M： 使用甲基化特异性引物的PCR。（E） 5-Aza-dC诱导肝癌细胞GLS2 mRNA水平。通过Taqman实时PCR测定GLS2 mRNA水平，并用肌动蛋白标准化。用二甲基亚砜处理的对照细胞中GLS2的相对水平指定为1。数据以平均值±标准差（n=3）表示。**：第页<0.001; 学生t吨-测试。