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表2

单个细胞对指示的[Ca增量的反应总结2+]o(o)瞬时转染WT-CaSR或指示Ca突变的HEK293细胞2+-结合位点

用WT-CaSR或Ca瞬时转染HEK293细胞前1天,将其接种在盖玻片上2+结合相关CaSR突变体。48小时后,如“材料和方法”所述,用Fura-2加载细胞2+]o(o)记录了[Ca2+]振荡开始或达到一个平台,分别称为起点和终点。对于没有-Phe,在[Ca水平下记录频率(峰值/分钟)2+]o(o)大多数细胞(>50%)开始振荡,而对于5m的实验 -Phe,在相应的[Ca水平上分析频率2+]o(o)在没有-苯丙氨酸。具体来说,在3.0 m处研究了频率[加利福尼亚州2+]o(o)对于WT,12.5 m[加利福尼亚州2+]o(o)对于E297I,10.0 m[加利福尼亚州2+]o(o)对于D215I和D398A/E399I,4 m[加利福尼亚州2+]o(o)用于E224I和5.0 m[加利福尼亚州2+]o(o)用于E353I。共从三个独立实验中分析了30多个细胞。数值为平均值±S.E.NA,不可用。

预测的站点残留物突变体起点
终点
频率
没有-苯丙氨酸使用-苯丙氨酸没有-苯丙氨酸使用-苯丙氨酸没有-苯丙氨酸使用-苯丙氨酸
重量重量3.0 ± 0.12.0 ± 0.26.4 ± 0.34.3 ± 0.21.5 ± 0.12.2 ± 0.2
站点1序号147,序列号170,天冬氨酸190,泰尔218,谷氨酸297E297I系列17.0 ± 0.4b7.3 ± 0.2不适用不适用1.6 ± 0.12.9 ± 0.1
站点2阿斯普215,亮氨酸242,序列号244,天冬氨酸248,格林253D215I型13.9 ± 0.2b6.7 ± 0.3不适用17.7 ± 0.31.8 ± 0.12.5 ± 0.2
站点3谷氨酸224,谷氨酸228,谷氨酸229,谷氨酸231,谷氨酸232E224I型5.0 ± 0.2b3.2 ± 0.116.8 ± 0.311.0 ± 0.11.4 ± 0.22.2 ± 0.1
站点4谷氨酸350,谷氨酸353,谷氨酸354,阿斯恩386,序列号388E353I型3.4 ± 0.1b2.4 ± 0.110.8 ± 0.24.9 ± 0.21.2 ± 0.22.0 ± 0.2
站点5谷氨酸378,谷氨酸379、Thr396,天冬氨酸398,谷氨酸399D398A/E399I9.3 ± 0.1b5.5 ± 0.2不适用不适用1.4 ± 0.22.2 ± 0.2

表示在同一突变体中的相应实验的显著性-苯丙氨酸(第页< 0.05).

b表示与野生型CaSR相关的重要性,无-苯丙氨酸(第页< 0.05).