图6

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考虑场地环境预测场地效能的定量模型

(A) 使用更多3'配对的7mer-m8站点的效率提高。使用单个站点的消息按照图2F,并且对于每个得分,绘制微阵列上的平均下调。回归线是对完整数据的最佳最小二乘拟合,表示得分与数组下调之间的关系(P(P)< 10−3,r=−0.07,皮尔逊相关)。平均日志2显示折叠变化(−0.161)(虚线)。配对得分<1或>5的少数位点分别折叠到第一个和最后一个箱子中。

(B) 在较高的本地AU含量范围内提高7mer-m8位点的功效。根据中所述的评分,将具有单个站点的邮件分为14个大小相等的箱子图3B,其中1.0等于最大可能得分。对于每个bin,绘制的点对应于微阵列上的平均得分和平均下调,直线拟合如(A)所示(P(P)< 10−32,r=−0.21,皮尔逊相关)。

(C) 距离3'UTR末端更远的7mer-m8位点的疗效降低。根据与最近的UTR端的距离,将具有单个站点的消息拆分为14个大小相等的箱子,并按(B)所示绘制点和回归线(P(P)< 10−8,r=0.11,皮尔逊相关)。

(D) 单个7mer-m8位点的预测疗效与观察疗效之间的对应性。根据上下文得分,将具有单个站点的消息分为14个大小相等的箱子,通过预测三个上下文决定因素(面板a–C)平均值的偏移量,然后将这三个贡献添加到平均日志中,计算出每条消息的上下文得分27mer-m8站点的折叠变化(图S6). 点对应于每个箱子的平均得分和平均下调。回归线是最适合完整数据的最小二乘法(P(P)< 10−45,r=0.25,皮尔逊相关)。

(E) 当应用于未用于派生模型的数据集时,组合模型的性能。图中显示了siRNA转染后mRNA水平变化的累积分布(Jackson等人,2003年),在首次使用上下文得分预测了siRNA的顶部和底部四分位数后,使用上下文得分计算了siRNA中具有单个7mer-m8位点的信息的上下文得分(图S5);否则,如所示图1B(P(P)< 10−31,双面KS测试,比较顶部和底部四分位数)。

(F) 一个统一的模型,考虑7-8分子标准位点的差异效力和上下文决定因素的影响。根据该位点在小鼠、大鼠和狗的同源UTR中是否保守,将具有单个7mer-A1、7mer-m8或8mer位点的人类信息分为两组。对于每个站点,使用面板a–C的回归和其他两种类型站点的类似回归来计算上下文得分(表S6). 对于保守(橙色)和非保守(蓝色)集,根据上下文得分将位点分为14个bin,并绘制每个bin的平均得分和平均抑制。回归线适合完整数据(保守:P(P)< 10−24,r=0.25,不合格:P(P)< 10−50,r=0.32,皮尔逊相关性)。

(G) 根据上下文得分(F)进行排名,预测不同类型网站在有利或不利环境中的表现。所示为下调消息的最小数量,使用(E)等累积分布进行计算。

(H) MicroRNA介导的荧光素酶报告基因的抑制融合到3’UTR片段,该片段包含位于有利环境中的单个7mer-m8 miR-25位点。将转染控制标准化后,与每个报告构建物及其同源miRNA(miR-25)共转染的HEK293细胞的荧光素酶活性标准化为与突变miR-25位点和同源miRNA共转染报告者的荧光素酶活性,将联合转染的野生型报告基因结构和非同源miRNA(miR-196)的荧光素酶活性归一化为联合转染突变型报告基因和非同源micRNA的荧光素酶活性。绘制出归一化值,误差条代表12个重复中第三大和第三小的值,当比较同源和非同源miRNA的结果时,显示出明显的抑制作用(*,P(P)< 0.01; **,P(P)<0.001;Wilcoxon秩和检验)。每个基因名称下面是miR-25位点的上下文得分,以及用于计算该得分的三个上下文贡献,如(D)所示。

(一) MicroRNA-介导的荧光素酶报告基因的抑制融合到3'UTR片段,该片段包含一个7mer-m8 miR-25靶点,位于不利环境中,否则如(H)所示。