图5。

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细胞模型中的GAC上部结构。 A类B类内源性和V5标记的异位蛋白表达水平相似。C–E类GAC筛选出稳定的MDA-MB 231克隆。K325A-V5转染的细胞面积更大、更异质(C类),数量激增(D类)并从培养基中摄入更多谷氨酰胺(E类)与携带V5标记野生型蛋白或模拟质粒的细胞相比。F类ASCT2和SN2谷氨酰胺转运体的相对mRNA水平,如使用rRNA 18S作为看家基因的定量PCR所定义的,表明GAC。K325A-V5细胞不会过度表达这些转运体。G公司,全细胞裂解液中的谷氨酰胺酶活性,在20m存在下磷酸盐,表明GAC的流动率持续较高。K325A-V5样本,对抗肿瘤中的生理谷氨酰胺水平。H(H),左侧面板步进梯度SDS-PAGE(3-15%),然后对紫外线诱导的交联细胞内蛋白与结合的光反应氨基酸进行免疫印迹(抗V5),显示GAC的趋势。K325A-V5在细胞内形成更大分子量的超结构。在培养的活的完整细胞中进行紫外线诱导的交联。右侧面板使用ImageJ在非饱和信号条件下进行密度测定,以证明GAC大物种的差异交联。K325A-V5。与观察到的重组蛋白类似,表达纤维倾向性高活性GAC的细胞。K325突变株(GAC.K325A-V5)对BPTES治疗不太敏感,但仍增殖更多(左侧面板)消耗更多的谷氨酰胺(右侧面板)与BPTES处理的对应物相比。J型内源性GAC的敲除有利于上述表型差异的增强,更好地突出GAC的结果。K325A-V5表达。