L-谷氨酰胺和EAA的双向转运是mTOR激活的上游
（A） 在添加EAA或饥饿培养基（15分钟）之前，用L-谷氨酰胺或饥饿培养液（-）预培养饥饿细胞1小时。去除条件培养基（CM）并将其添加到未经处理的饥饿细胞中1小时（1-5道），并分析S6K1磷酸化。显示了EAA处理的L-谷氨酰胺激发细胞提取物中S6K1的磷酸化（第6条车道）。
（B） 除添加EAA后收集2.5、5、10和15分钟外，条件培养基的制备如（A）所示。
（C） 条件培养基中L-谷氨酰胺的LC/MS/MS离子色谱图，取自EAA前用饥饿培养基（PBS）预处理的细胞（左迹线）、PBS前用L-谷氨酰胺预处理的细胞（中迹线）或EAA前用L-谷氨酰胺预处理的细胞（右迹线）。
（D） 用标记的L-谷氨酰胺预处理饥饿的HeLa细胞1小时，清洗，然后用含有0.4 mM标记的L-亮氨酸（L-Leu/EAA）的EAA处理不同时间（分钟）。使用LC/MS/MS定量条件培养基（黑色符号）和细胞提取物（红色符号）中标记的L-谷氨酰胺的绝对水平。
（E） 如（C）中那样处理饥饿细胞，并定量用PBS、EAA或胰岛素处理2.5分钟后的L-谷氨酰胺流出（培养基浓度的倍数变化）。
（F） 按照（D）中的方法处理细胞，2.5分钟后，定量细胞中流出的标记L-谷氨酰胺（黑色）和标记L-亮氨酸（红色）的绝对水平。
（G） 用10 mM标记L-谷氨酰胺或标记L-谷氨酸预处理1小时的细胞进行清洗，用含有标记L-亮氨酸的EAA处理2.5分钟并提取。
（H） 在缺乏或存在10 mM GPNA的情况下，用标记的L-谷氨酰胺处理饥饿细胞1小时。对细胞提取物中L-谷氨酰胺的绝对水平进行了定量。
（一） 用标记的L-谷氨酰胺处理细胞1小时，洗涤并用0.4 mM标记的L-亮氨酸在无BCH或D-Phe的情况下孵育2.5分钟。
带误差条的数据表示平均值±SD。
