图2

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L-谷氨酰胺整合EAA和生长因子对mTORC1的信号传导并调节S6K1的时间动力学

(A) 在添加EAA或EAA/GLN之前,用L-谷氨酰胺(GLN预负荷)或饥饿培养基(–)预培养饥饿的HeLa细胞1小时,直至达到指定的时间。通过蛋白质印迹分析S6K1的磷酸化。

(B) 细胞用L-谷氨酰胺(G)或EAA(E)预处理1小时,并在裂解前用EAA、L-谷氨酰胺或EAA/GLN孵育15分钟。

(C) 除胰岛素(100 nM)或EGF(25 ng/mL)外,其他细胞按(A)处理。

(D) 用L-谷氨酰胺或饥饿培养基预处理1小时的细胞,然后分别用EAA或EAA/GLN培养指定时间。

(E) 用10 mM L-谷氨酰胺、L-谷氨酸(GLU)或α-酮戊二酸(αKG)预处理1小时的细胞进行清洗,然后用饥饿培养基或含EAA的培养基培养15分钟。

(F) 用10 mM L-谷氨酰胺或13种非必需氨基酸(NEAA)预处理细胞1小时,清洗细胞,然后用饥饿培养基或含EAA的培养基培养15分钟。

(G) 将饥饿的HeLa细胞按指示处理1小时并溶解。

所有数据均代表至少三个独立实验。