mTORC1效应器信号转导的谷氨酰胺依赖性调节
(A) 用DMEM或EAA处理缺乏生长因子和营养素(饥饿)的HeLa细胞60分钟。S6K1的磷酸化通过389和S6235/236系列和S6240/244和S6K1的总水平(显示70kDa细胞质和85kDa核亚型)通过蛋白质印迹法进行评估。
(B) HeLa细胞如(A)所示饥饿,然后用指示浓度的EAA和/或L-谷氨酰胺处理60分钟。EAA浓度(x倍)基于DMEM中的最终浓度(1×)。S6的磷酸化235/236系列使用细胞内western分析进行定量,并表示为与饥饿细胞相比的fold-增加。
(C) 将饥饿的HeLa细胞与DMEM或L-谷氨酰胺缺乏的DMEM(DMEM-GLN)孵育60分钟,并将S6磷酸化235/236系列已量化。
(D) 如图所示,将饥饿的HeLa细胞处理60分钟,S6的磷酸化235/236系列已量化。使用1 mM L-或D-谷氨酰胺。
(E) 按照指示处理饥饿的HeLa细胞,并磷酸化S6K1通过389按照补充中的描述进行了量化。
(F) 饥饿的HeLa细胞按指示处理60分钟,4EBP1和eIF4G水平与7米使用western印迹分析GTP珠。
(G) S2或S2-R果蝇属然后在有或无L-谷氨酰胺的情况下,用氨基酸处理缺乏血清和氨基酸的细胞。
所示数据代表三个独立实验。带误差条的数据表示平均值±SD。