图1

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L-谷氨酰胺(Gln)可能通过酶促释放氨来实现抗酸,从而在癌细胞生长中发挥重要作用。(A)HeLa和MCF-7细胞在缺乏Gln的情况下生长,并持续提供缓冲培养基。在pH 6.3和7.3的条件下培养HeLa和MCF-7细胞,不含Gln。每8小时更换一次培养基,以保持相对恒定的pH值。用CV染色法测定细胞密度。(B)HeLa和MCF-7细胞在低pH的培养基中消耗更多的Gln,释放更多的谷氨酸(Glu)。使用了两个pH值,6.5和7.0。通过质谱分析测定Gln和Glu浓度。(C)谷氨酰胺酶活性的抑制导致细胞在酸性环境下的存活和生长减少。相对细胞生长表示细胞在不同培养基中生长8小时后细胞数量的归一化变化。0.05的相对细胞生长值意味着与0小时相比增加了5%的细胞生长。结果显示为10个独立实验的平均值。介质pH值由25 mM管道缓冲。(D)GLS1剪接变异体GAC的活性高于KGA,尤其是在pH值6.0时。这里显示的是在体外GAC和KGA在不同pH值下的活性表征。谷氨酰胺酶活性通过基于谷氨酸脱氢酶的两步谷氨酰胺酶方案进行测量。此处使用的蛋白质包含N末端截断(残基1-122),以便在大肠杆菌.(E)图示说明我们关于Gln在癌细胞生存中的基本作用的假设。