图1。在氨基酸饥饿后，ULK1和ULK2的缺失会抑制自噬。(一个)野生型（WT），乌尔克1击倒（ULK1KO），Ulk2公司击倒（ULK2KO）和两个独立推导的乌尔克1/Ulk2公司用含50nM巴非霉素A的全营养培养基（F）、EBSS（-AA）或EBSS处理双敲除（DKO）MEF株系₁（Baf）2 h。用针对ULK1、肌动蛋白和LC3（纳米工具5F10单克隆）的抗体对溶解的细胞裂解物进行免疫印迹。“*”表示ULK1免疫印迹上的非特异性带。用SV40 T抗原永生化MEF株。下图：LC3-II/LC3-I信号用2种不同的y轴标度绘制为平均值±SEM（n=4）。在相同条件下，对WT MEF值进行双尾配对t检验：*p<0.04**p<0.005；^一p=0.14；^b条p=0.056；^c（c）p=0.12。(B类)从MEF株系中提取总RNA，如(一个)并分析了乌尔克1和Ulk2公司使用定量RT-PCR的转录水平。绘图显示乌尔克1或Ulk2公司标准化为的级别肌动蛋白转录水平（平均±SEM，（n=3），与WT细胞相关的值）。(C类)WT和DKO MEF线被视为(一个)用磷酸化-（Ser79）乙酰辅酶A羧化酶（P-ACC）、磷酸化-核糖体蛋白S6（P-RPS6）抗体对溶解的细胞裂解物进行免疫印迹；肌动蛋白和LC3（5F10单克隆抗体）。(D类)在裂解和免疫印迹分析之前，将MEF系置于全营养培养基（F）或葡萄糖饥饿（−Glc）中16 h，如(C类). (E类)MEF系用C14-缬氨酸稳定标记过夜，追踪24小时，并分析氨基酸饥饿2小时后的蛋白质降解情况。图中显示了平均±SEM（n=3）。对WT MEF进行双尾配对t检验：*p<0.02**p<0.01。(F类)WT和乌尔克DKO#1 MEF被视为(一个)固定2h，进行LC3免疫染色。所示为−AA和−AA+Baf条件的典型共焦图像。比例尺：10μm。图中显示了平均点/细胞±SEM（每列：两个实验中每种条件下的n=22至39个细胞）。在相同条件下与WT MEF比较时的双尾配对t检验：***p<0.0003*p<0.02。(G公司)初级WT和DKO MEF处于饥饿状态，如(一个)并裂解用于SQSTM1和肌动蛋白的免疫印迹分析。右：绘图密度测定法[SQSTM1水平归一化为肌动蛋白，显示为平均值±SEM（n=4）]。在相同条件下与WT MEF进行比较时，双尾配对t检验：*p<0.04，**p<0.01。