图2

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包含有图案的血管结构和活细胞的整体组织结构。()示意图概述。一个开放的、相互连接的、自支撑的碳水化合物玻璃格子被3D打印出来,作为血管构筑物铸造的牺牲元素。晶格与活细胞一起封装在ECM中。晶格在几分钟内溶解在细胞培养基中,不会损坏附近的细胞。该过程产生了一个整体组织结构,其血管结构与原始晶格相匹配。(b条)单个碳水化合物玻璃纤维(顶部直径200µm)封装在纤维蛋白凝胶中。ECM交联后,将凝胶和长丝浸入水溶液中,溶解的碳水化合物从产生的通道(中间)流出。去除纤维丝会在纤维蛋白凝胶中形成开放的灌注通道(底部,标尺=500µm)。请参见补充电影1全日制课程。(c(c))具有不同直径图案互连通道的纤维蛋白凝胶支持注入通道网络的荧光葡聚糖的对流和扩散传输(左上角,相位对比,标尺=500µm)。凝胶和通道的归一化荧光线图(蓝色箭头)显示了通道中的正弦曲线(在黑色虚线之间),具有圆柱体和从通道到散装凝胶的时间扩散特性。虚线框区域的放大显示了两个垂直通道之间的椭圆形血管间连接(右侧,比例尺=100µm)。(d日)将组成性表达EGFP的细胞封装在多种ECM材料中(5e6/mL),然后用共焦显微镜成像,以可视化示意图所示的基质(红色珠子)、细胞(10T1/2,绿色)和可灌注血管腔(蓝色珠子)(右下角). 这些材料具有不同的交联机制(如上图所示),但都可以通过血管通道形成图案。比例尺=200µm。(e(电子))培养两天后,将未标记的HUVEC(1e6/mL)和10T1/2(1e6mL)共培养物(不表达EGFP)的代表性横截面图像均匀封装在纤维蛋白凝胶(10 mg/mL)的间隙中,并在可灌流网络中,用荧光活/死分析染色(绿色,钙蛋白AM;红色,埃塞俄比亚同二聚体)。细胞存活并在开放的圆柱形通道附近扩散(用白色箭头突出显示)。比例尺=200µm。