5 | 殖民地不会消失 | 移液太轻 | 用强力动作一次冲洗掉大部分细胞。 |
| | 治疗不足 | 延长治疗时间 |
| EDTA处理过程中菌落脱落过多 | 治疗时间过长 | 缩短处理时间或跳过一个清洗步骤。 |
| | 更换缓冲器时板受到过多干扰 | 治疗期间,不要摇晃或旋转盘子。 |
| | | 细胞可以用E8培养基中和和收集。旋转并电镀,或直接电镀悬浮液并在1小时后再次更换介质 |
8 | 细胞存活率低 | 细胞传代不够频繁 | 细胞需要每隔4天传代一次。如果培养超过5天,则添加ROCK抑制剂 |
| | 细胞过度融合 | 当细胞达到80%汇合时,传代细胞。可以添加ROCK抑制剂以帮助存活。 |
| | 移液过多 | 不要重复用移液管移细胞。经过充分处理后,细胞很容易从平板上洗掉。 |
| | 过度治疗导致单细胞过多 | 缩短处理时间或跳过一个清洗步骤。 |
| | EDTA浓度过高 | 将EDTA浓度从5降至0.5–2 mM。 |
9 | 多能性标记表达不良 | 试剂质量 | 中所列试剂的批量测试. |
17 | 假定iPSC不会从板上脱落 | 汇流板需要更多EDTA来去除钙 | 增加EDTA处理时间或增加更多清洗步骤。 |
| | | 如果iPSC菌落罕见,则瞄准潜在的 专门去除iPSC菌落 iPSC。 |
| 细胞存活率低 | 细胞过度融合 | 添加岩石抑制剂。 |
26 | 无附加菌落 | 殖民地太大了 | 收获前将菌落切成小块。 |
| | 非iPSC形态 | 采集的菌落可能不是iPSC菌落,提高了iPSC的识别能力 |
27 | 生存率低 | 细胞过度融合 | 添加岩石抑制剂 |
| | | 将培养物移至缺氧状态(5%O2) |