表3

故障排除表

步骤问题可能的原因解决
5殖民地不会消失移液太轻用强力动作一次冲洗掉大部分细胞。
治疗不足延长治疗时间
EDTA处理过程中菌落脱落过多治疗时间过长缩短处理时间或跳过一个清洗步骤。
更换缓冲器时板受到过多干扰治疗期间,不要摇晃或旋转盘子。
细胞可以用E8培养基中和和收集。旋转并电镀,或直接电镀悬浮液并在1小时后再次更换介质
8细胞存活率低细胞传代不够频繁细胞需要每隔4天传代一次。如果培养超过5天,则添加ROCK抑制剂
细胞过度融合当细胞达到80%汇合时,传代细胞。可以添加ROCK抑制剂以帮助存活。
移液过多不要重复用移液管移细胞。经过充分处理后,细胞很容易从平板上洗掉。
过度治疗导致单细胞过多缩短处理时间或跳过一个清洗步骤。
EDTA浓度过高将EDTA浓度从5降至0.5–2 mM。
9多能性标记表达不良试剂质量中所列试剂的批量测试表2.
17假定iPSC不会从板上脱落汇流板需要更多EDTA来去除钙增加EDTA处理时间或增加更多清洗步骤。
如果iPSC菌落罕见,则瞄准潜在的
专门去除iPSC菌落
iPSC。
细胞存活率低细胞过度融合添加岩石抑制剂。
26无附加菌落殖民地太大了收获前将菌落切成小块。
非iPSC形态采集的菌落可能不是iPSC菌落,提高了iPSC的识别能力
27生存率低细胞过度融合添加岩石抑制剂
将培养物移至缺氧状态(5%O2)