图3

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突变对在SN1和5S rDNA染色质结构与基因表达

(A) CpG(左)、CpNpG(中)和CpHpH(右)甲基化分析在SN1通过基因组DNA的亚硫酸氢盐测序。

(B) 用甲基化敏感限制酶HpaII(左)和MspI(右)消化5S rDNA的印迹分析。HpaII对CpG和CpNpG甲基化敏感,而MspI只对CpNp甲基化敏感。甲基化由上升阶梯表示,对应于5S rDNA多聚体(单体=约0.5 kb)。对每种植物的重复样品进行了分析。

(C) 使用抗二甲基活塞H3K9和二甲基活塞H1K4抗体进行ChIP分析。与免疫沉淀染色质相关的基因组DNA通过半定量PCR分析,引物对特异性为在SN1、逆转录转座子逆转录酶(At4g03800)(H3K9甲基化的内部控制)和PFK(At4g 04040)(H3 K4甲基化的外部控制)。对PCR产物进行量化,并与各自的内部对照进行比较,相对H3K4和H3K9甲基化水平相对于Col-0中的甲基化水平进行表达(任意设置为1.00)。

(D) 检测在SN1-半定量RT-PCR检测特定转录物。PFK转录物特异性引物被用作内部控制。在不添加逆转录酶(RT)的情况下进行一组平行反应,作为基因组DNA污染的质量控制。PCR产物相对于PFK进行归一化,并相对于Col-0(任意设置为1.00)计算表达水平。