纯化的活性PDGF-D治疗下调miR-200家族的表达并诱导EMT。（A） 使用Trizol试剂分离总RNA。使用miRNA特异性Taqman MGB探针和引物测定miRNA水平。miRNA的相对量归一化为RNU6B。（B） 用实时RT-PCR定量检测纯化活性PDGF-D蛋白处理4周的PC3细胞与对照组PC3细胞中ZEB1、ZEB2、snail2、E-cadherin和vimentin mRNA的表达。相对mRNA水平根据GAPDH标准化。用纯化的活性PDGF-D处理Panel（C）和（D）PC3细胞10或20天，然后制备细胞裂解物。Western blot分析显示，ZEB2表达增加，E-cadherin表达降低，呈剂量依赖性。（E） 测定纯化活性PDGF-D处理对PC3细胞脱附的影响，结果表明，PDGF-D4周处理后PC3细胞的脱附明显增加。（F） 使用24孔Transwell渗透支架和8μM孔测定纯化活性PDGF-D处理对PC3细胞迁移的影响。显示了相对荧光的值。这些值表示迁移的单元格的相对数量。*，与对照组相比，p<0.05，**，p<0.01。
