图5。

MYC显著增加谷氨酰胺中脯氨酸的生物合成(A类)四环素处理P493细胞不同时间后脯氨酸和谷氨酰胺分解代谢途径酶的蛋白质印迹。(B类)用抗MYC（siMYC）或阴性对照siRNA（siNeg）的siRNA转染PC3细胞。用Western blots分析脯氨酸和谷氨酰胺代谢途径中的酶。实验得到了类似的结果。(C类)MYC-On和MYC-Off细胞中的细胞内脯氨酸水平。(D类)[U中的预期标记模式-¹³C、，¹⁵N] -谷氨酰胺（Gln）和预先存在的未标记Gln通过谷氨酸（Glu）与脯氨酸（Pro）的不同同位素和TCA循环的中间产物结合。[¹³C类₅,¹⁵N个₂]-Gln可以通过谷氨酰胺酶（GLS）分解代谢产生¹³C类₅,¹⁵N-谷氨酸（Glu）（m+6），可直接转化为¹³C类₅,¹⁵N-Pro（m+6）通过图1A类或者，¹³C类₅,¹⁵N-谷氨酸可以转化为α-酮戊二酸（α-KG），并通过TCA循环代谢。α-KG与Glu的反向反应使¹⁵N重新并入Glu（例如，生产¹⁵N个₁-谷氨酸）通过转氨酶（TA）和/或谷氨酸脱氢酶（GDH）活性。所示的碳轨迹说明了¹³TCA循环三圈后的C命运。●,¹²C或¹⁴N；红色圆圈，¹³C在第一个转弯处；绿色圆圈，¹³第二圈C；粉红色圆圈，¹³第三圈C；蓝色圆圈和N，¹⁵N；氨基酸；单箭头和双头固体箭头：分别为单次不可逆和可逆反应；虚线箭头，多步反应；氨基酸；CS，柠檬酸合成酶；PDH、丙酮酸脱氢酶。(E类和F类)GC-MS分析[¹³C、，¹⁵N] -在MYC开启和关闭的情况下，Gln对P493细胞中柠檬酸和脯氨酸合成的贡献。所有GC-MS数据均根据天然丰度同位素贡献进行校正，并归一化为细胞颗粒湿重。每个值是重复样本的平均值。整个实验重复了三次。