图4:

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急性DNA损伤后,体内出现层粘连蛋白B1丢失。(A) 层粘连蛋白B1免疫荧光的代表性图像。HCA2细胞接受模拟照射(PRE)或照射(XRA),并允许衰老(SEN(XRA))。固定细胞并对层粘连B1进行免疫染色。(B) 通过免疫荧光验证层粘连蛋白B1定量:核强度直方图。HCA2细胞按A处理。使用细胞轮廓仪测量每个确定核区域的层粘连B1强度。p<0.0001(C)小鼠肝脏层粘连蛋白B1染色的代表性图像。对小鼠进行辐照(7-Gy XRA)或未经治疗(对照)。12周后,取肝脏,切片,免疫染色检测层粘连蛋白B1。在每个确定的核区域测量了层蛋白B1的强度。(D) 照射后小鼠肝脏中的层粘连蛋白B1而非层粘连素C核强度下降:核层粘连强度直方图。对小鼠进行辐照或未经处理(对照)。12周后,采集肝脏,切片,并对其进行层粘连B1(顶部)和层粘连C(底部)的免疫染色。核染色用细胞轮廓仪定量。在对照组和XRA条件下,通过平均四只小鼠的相对贡献来计算垃圾箱数量。(E) 照射后小鼠肝脏中的层粘连蛋白B1而非层粘连素C核强度下降:平均核层粘连强度。D的数据表示为四只小鼠在对照和XRA条件下的平均层粘连强度的平均值。层粘连B1的p=0.02,层粘连C的p=0.71。(F)照射后层粘连B1mRNA在体内下降。在照射后12周,从对照小鼠和小鼠的肝脏、肺、肾和皮肤中获取。mRNA被纯化,层粘连蛋白B1 mRNA水平通过定量PCR测定,标准化为微管蛋白。为了从每只小鼠的四个器官中产生一个单独的层粘连蛋白B1 mRNA值,对每个器官进行等量加权(每个器官的平均对照层粘连肽B1水平设置为1),并将每个小鼠的层粘着蛋白B1水平合并。然后对每种情况下的整只小鼠池进行平均:对照组,n=4;7-Gy X射线衍射仪,n=5。