图1

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ULK1、Atg14、WIPI-1、Atg16L1和LC3共同定位于同一隔室,该隔室与DFCP1结构非常接近。(A–H)在饥饿培养基中培养1小时,稳定表达GFP-ULK1(A)、GFP-ULK1和HA-Atg14(B)、HA-Atg 14和GFP-WIPI-1(C)、HA-WIPI-1。然后固定、渗透细胞,并使用抗HA(B、C、G和H)、抗Atg16L1(A、D和E)和抗LC3抗体(F)进行免疫荧光显微镜检查。由于低表达,GFP-ULK1和GFP-DFCP1被抗GFP抗体染色。箭头表示几乎完全的共同定位,箭头表示相邻的共同定位。用虚线表示的结构进行了线扫描分析(如J、K和补充图3). 信号颜色由字体的颜色表示。St.M.,饥饿培养基。比例尺,10微米(白色)和1微米(黄色)。(一) 饥饿1小时后,所示Atg蛋白对之间完整和相邻共定位的量化。数据代表10幅图像的平均值±SE。从具有代表性的点状结构中获得(J–K)线扫描,显示GFP-WIPI-1和Atg16L1(J)之间以及HA-WIPI-1与GFP-DFCP1(K)之间存在共定位。原始结构如(D和H)所示(用虚线表示)。(五十) Atg船形结构的三维重建。用激光共聚焦显微镜观察饥饿1小时的细胞,然后重建3D图像。还显示了从Z截面重建的侧面图像。比例尺,1µm。