图6

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eYFP-PICK1在COS7细胞中的聚集及囊泡结合

(A) 代表性图片显示,与瞬时转染COS7细胞中的eYFP-PICK1 S77D相比,eYFP-PICK1的聚集性降低。箭头指向簇。(B) 与S77D相比,WT聚类的量化。通过计算含有至少一个eYFP-PICK1或eYFP/PICK1 S77D胞浆簇的细胞分数来量化聚类。簇被定义为强度为eYFP平均细胞溶质强度1.5倍的区域。数据是从三个独立转染获得的平均值±SE。每个样本中至少拍摄了10张照片,并计数了大约50个细胞*在双侧学生t检验中P<0.01,n=3,误差条代表SE值。(C) western blot检测表达水平的量化。eYFP-PICK1水平归一化为肌动蛋白,S77D水平计算为平行转染的WT,n=5,其中每个n代表一个独立转染。(D) PICK1 WT(左)和PICK1 S77D(右)脂囊下拉的代表性凝胶。纯化的PICK1 WT或S77D在超速离心之前与脂质囊泡孵育,并通过SDS-PAGE和western blotting分析颗粒(P)和上清液(S)组分。装载所有颗粒和1/5上清液。车辆=小泡。(E) 脂质结合的定量在体外囊泡下拉试验。数据为囊泡结合分数(平均值±SE,n=3)。囊泡结合分数计算如下(弹丸+车辆)总蛋白质+车辆负极(弹丸负极车辆)总蛋白质负极车辆.