ATF4调节胃癌细胞的MDR表型。（A） 采用Western blotting和qPCR检测多药耐药胃癌细胞（SGC7901/ADR和SGC7901/VCR）和亲代SGC7902细胞中ATF4的蛋白和mRNA水平。β-actin和GAPDH分别作为内部对照。数据表示三个独立实验的平均值±S.D。（B） 通过集落形成试验检测稳定转染SGC7901和AGS的LV-Vector和LV-ATF4对顺铂的反应。用0或0.25µg/ml顺铂连续处理细胞系14天；每3天更换一次培养基。细胞被镀成三份，实验重复三次。显示了具有代表性的油井。图提供了以未处理细胞百分比表示的平均量化。（C） 用0或0.5µg/ml顺铂连续处理LV-SCR和LV-siATF4稳定转染的SGC7901/ADR和SGC7901-VCR细胞14天；每3天更换一次培养基。（d）和（E）LV-Vector和LV-ATF4稳定转染SGC7901细胞株，LV-SCR和LV-siATF4稳定转基因SGC7901/ADR细胞用指定剂量的不同药物处理72小时。体外MTT法检测药物敏感性。数据表示三个独立实验的平均值±S.D。（F） 和（G）LV-Vector和LV-ATF4稳定转染的SGC7901细胞系、LV-SCR和LV-siATF4稳定转染的SGC 7901/ADR细胞及其各自的未经处理的对应物（NC）在新鲜培养基中生长，并存在指示浓度的顺铂（对于SGC7901-NC、SGC7900-Vector和SGC7901-ATF4，5µG/ml；对于SGC7901/ADR-NC、SGC7901/ADR-SCR和SGC7901-ADR-siATF4，10µg/ml），持续36小时。然后进行Hoechst 33258核染色和DNA片段分析。（H） 将上述SGC7901和SGC7901/ADR稳定转染细胞系在具有指示浓度顺铂的新鲜培养基中再培养6–24小时（对于SGC7901-Vector和SGC79 01-ATF4，10µg/ml；对于SGC79 01/ADR-SCR和SGC7 901/ADR-siATF4来说，20µg/ml）。在指定的时间，收集蛋白质提取物，并对caspase-3（未分离和裂解形式）进行免疫印迹分析。β-actin作为内部对照。
