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腺病毒E1区对哺乳动物细胞原核基因表达的反式作用：对5'-CCGG-3'甲基化的抗性。
摘要
质粒构建物pSVO-CAT已用于检测腺病毒启动子在非甲基化或甲基化状态下的活性。我们现在已经观察到，腺病毒2型（Ad2）DNA的E2A晚期启动子在pAd2E2A-CAT构建物转染哺乳动物细胞后也激活了氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因，并且通过三个5'-CCGG-3'位点的特定甲基化使其失活。此前，非洲爪蟾卵母细胞微量注射启动子甲基化构建物后也有类似的结果。令人惊讶的是，发现缺乏真核启动子序列的pSVO-CAT构建物在转染到含有Ad2或Ad5 DNA E1区并组成性表达的人或仓鼠细胞后能够表达CAT基因。在这些细胞中，pAd2E2ACAT构建体的表达增强，但它对DNA甲基化仅部分敏感，这可能是因为DNA甲基化被E1功能直接或间接抵消。与携带含有E1A区和部分E1B区的Ad2 DNA HindIII-G片段的质粒共转染后，pSVO-CAT结构也在HeLa或BHK21细胞中表达。通过定位pSVO-CAT特异性RNAs，我们可以证明Ad2或Ad5转化细胞中的pSVO-CAT活性是由构建物pBR322段中的原核启动子样序列介导的，它可能通过E1区介导的反激活发挥作用。腺病毒转化细胞中pSVO-CAT的这种反激活对DNA甲基化部分不敏感。
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