图5

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多西环素依赖性基因表达与SADΔG-GFP-rtTA狂犬病病毒的条件性突触性传播

(A,B)在用pTetO-CMVmin-Histone2B-mCherry-F2A-B19G和pCMMP-TVA对大鼠皮层切片培养的分离神经元进行生物转染后,应用EnvA-假型SADΔG-GFP-rtTA导致转染神经元的选择性感染。(A) 狂犬病病毒表达的dox和rtTA的存在允许mCherry在EnvA-SADΔG-GFP-rtTA感染的神经元中表达,如“突触后神经元”胞体的黄色(GFP和mCherri)外观所示。狂犬病糖蛋白在同一突触后神经元中的表达允许ΔG狂犬病互补,因此病毒可以传播到许多突触前神经元并在其中表达GFP。(B) 在没有dox(1.0μg/ml)的相同条件下,EnvA-SADΔg-GFP-rtTA狂犬病病毒也选择性感染分散的、孤立的TVA表达神经元。但如果没有dox,则没有mCherry或狂犬病糖蛋白表达,因此狂犬病病毒没有互补或跨突触传播。在没有dox的情况下,在脑切片中只能发现三个转染和最初感染的神经元(箭头所示的绿色细胞)。比例尺,100μm(右图),50μm(左图)。