图1

（A，B）SADΔG-mCherry（A）和SAD△G-BFP（B）狂犬病病毒的产生。（A） 将SADΔG-mCherry注射到dLGN后，观察到大鼠初级视皮层第6层的神经元。（B） 大鼠视皮层2/3层和4层的神经元通过向附近的视皮层注射SADΔG-BFP进行标记。比例尺，100μm。（C） 每个开放阅读框都需要在狂犬病基因组中的开放阅读框前后插入转录起始和终止序列。为了插入额外的外源基因，在GFP的最后一个密码子与其转录结束序列之间插入带有额外转录开始和停止序列（黑色，轮廓为红色）的mCherry，然后插入mCherry。（D，E，F）感染SADΔG-GFP-mCherry的皮层切片培养中的神经元。所有感染SADΔG-GFP-mCherry的神经元均表达mCherri（D，F）和GFP（E，F），表明这两种基因产物的转录调控和表达是可靠的。比例尺，100μm。（G） 为将一个或两个转硫基因高效导入狂犬病基因组而创建的质粒。pSADΔG-F3狂犬病基因组载体有两个多克隆位点（MCS-1和MCS-2），用于插入感兴趣的基因。对于狂犬病载体中单个基因的表达，使用MCS-1中的一个位点和MCS-2中的一种位点可以插入单个ORF并删除停止和启动转录盒。为了克隆两个转基因，将每个基因插入MCS-1和MCS-2中，可以从狂犬病载体中实现可靠的共表达。