图1

线粒体呼吸缺陷自动液位计8诱导和自噬流量。(A类)野生型和rho⁰含有pr的细胞^{自动液位计8}-GFP-ATG8（上部面板）或pr^{自动液位计8}-绿色荧光粉（下面板）暴露于氨基酸或氮饥饿（-N）培养基中，补充有指定的碳源。通过全细胞提取和使用α-GFP和α-Cdc11抗体的western blot分析，在指定的时间点对细胞进行分析。量化自动液位计8感应显示在左下面板中。总GFP信号（GFP-Atg8和游离GFP）被量化并归一化为Cdc11信号。将0小时时的归一化值设置为1，并显示饥饿6小时后的相对变化。右下角显示了饥饿6小时后自噬通量的定量，即游离GFP与总GFP信号（GFP-Atg8和游离GFP）的比值。四的平均值和标准差(n个=4）指示进行独立实验。(B类)荧光显微镜分析。野生型，rho⁰和Δ第7天表达pr的细胞^{自动液位计8}-GFP-ATG8按照中所述种植(A类)暴露于氨基酸（左侧，半乳糖）或氮气饥饿（右侧，葡萄糖（-N））6 h。通过过夜FM4-64（1μM）染色（红色）观察液泡。箭头表示点状GFP-Atg8结构。透射和荧光显微镜图像叠加，以可视化细胞边界。至少在150个细胞中分析了GFP信号的细胞定位(n个⩾150）。比例尺代表1.5μm。