胃肠病学。作者手稿；PMC 2011年5月17日发布。
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雄性大鼠肝脏再生过程中性激素的相关功能
意大利巴里巴里大学消化系；宾夕法尼亚州匹兹堡退伍军人管理医疗中心；以及宾夕法尼亚州匹兹堡市匹兹堡大学医学和外科
请将转载请求发送至：A.Francavilla，医学博士，退伍军人管理医院，C栋，Circle Drive，Pittsburg，Pennsylvania 15240
摘要
对正常雄性大鼠肝脏和部分（70%）肝切除术后不同时间再生肝脏的性激素受体进行了定量。部分肝切除术显著改变了雌激素和雄激素受体的含量。肝脏总含量和雌激素受体的核保留增加，在肝部分切除术后2天达到峰值，与有丝分裂指数的峰值相对应。血清雌二醇在术后1天增加，术后3天达到最大值。相反，在切除术后1、2和3天，雄激素受体总量和核含量均出现大幅下降。血清睾酮水平也呈平行下降。此外，在此期间，两种雄激素反应蛋白的肝脏含量分别降至正常值的15%和13%。雄性大鼠肝脏再生过程中这些不同蛋白质的活性与正常雌性大鼠肝脏中观察到的活性相当。综上所述，这些结果表明，部分肝切除导致雄性大鼠肝功能某些性别差异方面的女性化。此外，这些数据证明雌激素而非雄激素可能在肝脏再生过程中发挥重要作用。
哺乳动物的肝脏对性激素都有反应。肝脏对雌激素有反应，因为它含有这种激素的受体，并通过合成特定蛋白质作出反应（参见参考文献1). 肝脏也含有雄激素受体(2–5). 事实上，在雄性大鼠中观察到的某些受体和微粒体酶的性二形性肝内容物是由睾酮维持的（参考文献综述1和6). 肝功能性别差异的最终控制权在于垂体。特别是，生长激素分泌模式，在性质上也是性二型的，似乎调节许多微粒体类固醇和药物代谢酶的肝脏水平以及类固醇受体水平(1,7,8).
自从希金斯和安德森最初报道(9)在大鼠部分肝切除术（PH）技术中，研究人员一直在研究肝切除和残肝的效果，目的是确定调节肝再生的机制。在过去的10年中，激素作为与PH后肝再生相关的因子发挥了重要作用。有人认为，胰岛素、胰高血糖素和表皮生长因子等激素制剂可能会启动再生过程(10–17); 然而，其他激素，如甲状旁腺激素(18)，降钙素(14)，碘甲状腺原氨酸(19)和糖皮质激素(20)也被证明会影响肝脏再生反应。
有几条证据表明雌激素在肝细胞增殖中具有潜在作用。首先，雌激素与某些以促有丝分裂活性增加为特征的肝脏疾病有关（综述于参考文献1和21). 此外，含有肝腺瘤和局灶性结节增生的肝脏显示雌激素受体（ER）含量增加(22). 因此，研究雌激素在再生中的潜在影响很有意义；在最近的一项研究中，我们小组报告了肝切除术后72小时内再生大鼠肝脏中细胞溶质和核ER的变化(23). 这些数据表明，再生肝脏的增殖活性与肝脏ER核定位的显著增加同时发生。然而，这项研究并没有检测血清雌二醇含量的可能增加，这可能是内质网定位增加的原因，也没有检测内质网肝脏总含量。我们现在扩展了研究范围，以回答这些问题，此外，还确定了PH对血清睾酮和雄激素受体（AR）和某些雄激素反应蛋白的肝脏含量的影响。
材料和方法
动物
这些研究中使用的雄性Sprague–Dawley大鼠（350 g）在温度和光照控制的房间内（6:30 AM–6:30 PM，灯亮），随意饮用标准的大鼠实验室饮食和水。根据希金斯和安德森的方法进行肝部分切除术(9). 所有手术均在上午7:30至9:00使用氯胺酮麻醉（10 mg/100 g体重）进行。在用作对照的假手术动物中，肝脏的操作方式与接受肝脏切除的动物的肝脏相同，但完好无损地返回腹部。这些动物在PH后12、24、48、72、96和144小时被斩首处死。
材料
雌激素和雌二醇（E2)采购自甾体类药物、Wilton，N.H.己烯雌酚、亮氨酸蛋白酶、苯甲脒、牛血清白蛋白、钼酸钠、鱼精蛋白硫酸盐和其他缓冲成分，采购自密苏里州圣路易斯Sigma Chemical Company。Norit A和右旋糖酐C购自宾夕法尼亚州匹兹堡Fisher Scientific Company(2,4,6,7,16,17)-[三H] 雌二醇([三H] E类2)，151 Ci/mmol；[三H] 甲基S-腺苷蛋氨酸，10 Ci/mmol；17α-甲基-[三H] 甲基三烯酮([三H] R1881）、非放射性R1881和Econofluor闪烁液均来自马萨诸塞州波士顿新英格兰核电站。水性计数闪烁体购自伊利诺伊州阿灵顿高地Amersham。在乙酸乙酯/己烷/乙醇（85:10:5）中，通过硅胶G薄层色谱定期分析这些研究中使用的放射性标记类固醇的纯度，并且仅在纯度为95%时使用。描述了其他材料的来源(23,24).
缓冲器
除非另有说明，否则所有实验均在0°–4°C下使用以下缓冲液进行：0.01 M Tris HCl，1.5 mM乙二胺四乙酸，pH 7.4（TE缓冲液）：TE缓冲液与5 mM二硫苏糖醇（TED缓冲液）；含20 mM钼酸钠的TE缓冲液（TEM缓冲液）；含0.25M蔗糖的TE缓冲液（TES缓冲液）；后两种添加（TEMS缓冲区）；和0.25 M蔗糖3 mM氯化镁2，10 mM HEPES，pH 7.4（SMgH缓冲液）；将含有20 mM钼酸钠的SMgH、pH 7.4（SMgHM缓冲液）亮肽（0.15 mM）和苯甲脒（1.0 mM）添加到用于制备细胞核和胞浆的所有缓冲液以及凝胶过滤色谱的缓冲液中。
雌激素结合研究
鱼精蛋白硫酸盐法测定胞浆雌激素受体
鱼精蛋白硫酸盐沉淀法测定细胞溶质ER；这种方法避免了[三H] E类2与雄性大鼠肝细胞液的高容量雄性特异性雌激素结合物（MEB）的结合(23,24). 如前所述制备其细胞质溶胶和鱼精蛋白硫酸盐沉淀物(23). 200的鱼精蛋白硫酸盐沉淀物-μl等分的肝细胞液与不同浓度的[三H] E类2在不存在（总结合）和存在（非特异性结合）超过100倍未标记E的情况下，在0.15–5.0 nM的范围内2在0°C下持续18小时。这些条件产生最大约束并代表平衡条件(23). 特异结合是通过从总结合中减去非特异性结合得到的。
核雌激素受体交换试验
使用Brinkman PT 10–35聚乙烯（Brinkman Instruments，Inc.，Westbury，N.Y.）在3 vol TEM缓冲液中均质肝脏（5 g），并按照之前的描述制备和清洗细胞核(23). 通过测定乙醇脱氢酶的活性来检测细胞核的细胞溶胶污染(25)在匀浆、胞质溶胶和洗涤的细胞核制剂中，发现在细胞核制剂中＜0.5%。核制剂中DNA的平均回收率为匀浆中DNA的72.8%。通过在10 nM的存在下培养核悬浮液（0.2 ml）来量化核ER[三H] E类2在SMgH缓冲液中，加入或不加入100倍过量浓度的未标记己烯雌酚，在30°C下放置1小时。每次检测一式三份。通过在冰上冷却管子5分钟，停止反应；通过用含0.1%Triton X-100的2ml SMgH清洗核颗粒，然后在800 g下离心10分钟，去除游离类固醇。用2ml SMg H再清洗核颗粒三次。用2ml无水乙醇在30°C下从核芯块中提取结合类固醇30分钟。在Packard Tri-Carb光谱仪（Packard Instrument Co.，Inc.，Downers Grove，Ill.）中对10ml含水计数闪烁体中的乙醇提取物进行计数。剩下的核团用于DNA含量的测定。
雄激素结合研究
亚细胞组分的制备
为了从同一肝脏制备所有亚细胞组分，将肝脏均匀化于3 vol TES缓冲液中。通过800 g匀浆离心15 min沉淀细胞核。通过SMgHM缓冲液中颗粒的再悬浮和再离心将粗核颗粒洗涤五次。将颗粒重新悬浮在SMgHM缓冲液中，使最终体积等于原始匀浆的体积。以这种方式制备的细胞核在光学显微镜下呈圆形，并用苏木精和伊红染色为蓝色。根据缺乏特异性细胞溶质染色（如上所述）和乙醇脱氢酶活性测定，最终的核制剂不含可检测到的细胞溶质污染(25).
为了制备细胞溶质和微粒体组分，将粗核颗粒的上清液以27000 g离心15分钟；小球被丢弃了。将倾析的上清液再次以150000 g离心30 min。此步骤产生的上清被视为细胞溶质部分。在最终离心后，立即将钼酸钠（20 mM）添加到用于受体测定的细胞质中，因为省略该盐会导致雄激素结合活性降低50%-70%。微粒体颗粒在SMgH中通过再悬浮进行清洗，再次离心，并在含有0.1 mM二硫苏糖醇的SMgH内再悬浮。微粒体悬浮液的最终蛋白质浓度通常为6–8 mg/ml，而细胞溶质部分的最终蛋白浓度为25–30 mg/ml。
细胞质中的雄激素结合测定
如上所述制备的细胞质溶胶在使用前用1 vol TEM缓冲液稀释。测定AR的所有培养包括500 nM曲安奈德，以阻断糖皮质激素受体对[三H] R1881绑定。用于定量细胞溶质受体，等分（200μl） 在4°C和0.2–5.0 nM条件下培养过夜[三H] 在不存在（总结合）和存在（非特异性结合）100倍过量的未标记的R1881的情况下。这两个值之间的差异被认为是特定的绑定。描述[三H] R1881结合活性作为细胞溶质AR已在其他地方报道(2,三). 雄激素配体通常用于其他组织[三H] 二氢睾酮，由于该底物的广泛代谢，不能用于肝细胞溶质；然而，没有代谢[三H] 在这些条件下可以检测到R1881。如前所述，在孵育期结束时，使用葡聚糖涂层活性炭将结合类固醇从游离类固醇中分离出来(24).
核结合分析
为了确定单点测定的类固醇的最佳浓度，等分试样（200μl） 将正常雄性和去势大鼠肝脏的核悬浮液与0.2–10 nM孵育[三H] R1881和1μ在没有（总结合）和存在（非特异性结合）100倍过量未标记R1881的情况下，M曲安奈德在4°C下过夜。特异性结合被计算为总结合和非特异性结合之间的差异。特定结合最符合使用所有点的饱和曲线分析数据计算的结合值的单一浓度为5 nM[三H] R1881（r=0.92）；当特异性结合饱和时，这些条件使非特异性结合最小化。按照核ER所述终止分析，但洗涤缓冲液不含洗涤剂除外。然后用2ml乙醇在30°C下提取清洗过的颗粒1h；将整个颗粒和提取物转移到20-ml闪烁瓶中，并添加8ml水性计数闪烁剂。证据表明[三H] R1881结合表示核AR已在别处描述(2,三).
雄激素反应性肝蛋白的测定
MEB的细胞溶质含量和微粒体雌激素2-羟化酶（E2-OHase）活性的测定在前面已经描述过(4). 简单地说，MEB通过凝胶过滤色谱在Sephadex G-100上的TED缓冲液中从其他细胞溶质雌激素结合蛋白中分离出来，然后用饱和剂量[三H] E类2（5 nM）在4°C下过夜。该分析是MEB的定量分析，在很大范围内与蛋白质浓度呈线性关系，包括该分析中使用的柱馏分。
微粒体E2-OHase通过Paul等人的方法进行分析(26)使用前面描述的修改(4). 简言之，雌酮被用作E2-OHase反应的底物。产品，1,3,5(10)-雌激素-17-酮-2,3，-二醇在第二个反应中用从[三H] 甲基S-腺苷蛋氨酸，通过部分纯化的儿茶酚-O-甲基转移酶转移形成产物[三H] 2-甲氧基-1,3,5(10)-雌激素-17-酮-3-醇。观察到的E2-OHase活性与氚化产物的形成速率成正比。通过两相闪烁计数确定产物的数量(4).
其他方法
蛋白质浓度由Bradford法测定(27); 用伯顿法测定匀浆和核制剂的DNA浓度(28). 根据三H标记的类固醇结合每毫克细胞质蛋白，然后校正每克肝脏细胞质蛋白的产量。核受体含量根据三核制剂中回收的每毫克H标记类固醇结合DNA，然后校正原始匀浆的DNA含量。每个计算都包括适当的体积修正。对于每只动物，受体的肝脏总含量代表基于1 g肝脏的细胞溶质和细胞核含量的总和。如前所述，通过特异性放射免疫测定法测定血清睾酮和雌二醇(29). 用Scatchard方法计算了平衡解离常数和结合位点浓度(30). 在德克萨斯仪器TI55计算器（德克萨斯仪器公司，德克萨斯州休斯顿）上对Scatchard图进行未加权线性回归分析。使用学生的t吨-可在Hewlett-Packard 9815S上使用测试程序（Hewlett Packard Co.，加利福尼亚州帕洛阿尔托）。使用自动dpm转换的Packard TriCarb 4530测定样品的放射性含量。水计数闪烁体用于单相闪烁计数。酸化水相Econofluor闪烁液(4)用于两相闪烁计数。
结果
显示ER的总内容(一)以及其在细胞溶质ER中的分布(B类)和核ER(C类)70%肝切除后不同时间大鼠肝脏。之前的研究(23)表明PH诱导肝脏内质网亚细胞定位的显著改变，导致胞浆内质网减少，核内质网随之增加。重新计算该数据以表达受体数量与肝脏重量的函数，如图所示细胞溶质ER在最初的12小时内迅速下降（0.3 pmol/g肝脏），并在肝切除术后48小时保持在该水平附近，此时细胞溶质的ER达到最低记录值（0.24±0.02 pmol/g肝脏）。12、24和48小时的细胞溶质ER值显著低于0小时的值（p<0.005）。此后，细胞溶质的ER含量恢复到略高于0时的水平，然后在观察期的剩余时间内恢复正常（0.63±0.06 pmol/g肝脏）。细胞溶质ER对E的亲和力2不随受体水平的变化而变化。在研究的所有时间点，细胞溶质ER的平衡解离常数值相似（0.5–2.5 nM）。相反，核ER水平()术后第1天小幅下降后，迅速增加，在48小时达到峰值（35 pmol/g肝脏），与0小时观察到的值有显著差异（p<0.005）。从72小时开始，肝脏细胞核ER含量缓慢恢复到正常水平（10±1 pmol/g肝脏）。表明肝总ER在PH后48小时也显著增加；总内质网增加与核内质网的增加平行，因为内质网以核形式存在于肝脏中。先前研究中观察到的核ER增加的一个潜在解释可能是PH导致血清E增加2内容。因此，我们测量了血清E2级别来确定是否是这种情况。这些结果如所示.血清E值2在手术后第2天上升，并且在第3天显著大于基础值（0次）（p＜0.005）。PH后ER分布的这些变化与再生肝脏中最大有丝分裂指数和DNA合成的时间相关(23). 在其他实验中，在手术后24小时和48小时，对错误操作的动物的受体水平进行量化；这些动物肝脏中的受体含量与时间0对照组中观察到的受体含量没有差异，这些肝脏也没有表现出有丝分裂指数或DNA合成增加。
雄性大鼠肝部分切除术后肝脏雌激素受体活性的变化。特定[三H] E类2在部分肝切除大鼠（70%肝切除术后数天）的肝细胞溶质和核组分中测定结合。这些值表示为每克肝脏中总肝脏含量的皮摩尔数(一)，细胞溶质结合(B类)和核结合(C类).B类和C类表示参考中先前描述的数据的重新计算23.血清E2通过特定放射免疫分析测定的水平（微克每毫升）如所示D。这些值表示为平均值±SD。显示了与时间0不同的值：*p<0.005，**p<0.01。在24和48小时杀死的假手术动物显示受体和血清E2水平与时间0时被杀的动物相同。
其他研究也证明了PH后肝脏AR的变化。显示AR的肝脏总含量(一)和细胞溶质AR的分布(B类)和核AR(C类)70%肝切除后不同时间大鼠肝脏。细胞溶胶AR水平()肝切除后24h开始缓慢下降，48h达到最低水平（10fmol/g肝脏）。从这一最低点开始，肝切除术后4天（30 fmol/g肝脏），细胞溶质AR值恢复正常，并在研究剩余时间内保持稳定。细胞溶质AR对雄激素配体的亲和力在任何时候都没有检测到显著变化。具体来说，平衡解离常数没有变化，范围为0.55-1.8 nM。与核ER增加相比()肝切除术后第1天，肝细胞核AR含量迅速下降，接近0（3.0±0.2 fmol/g肝脏），并在接下来的48 h内保持在该水平(). 从72小时开始，肝切除术后6天，细胞核AR水平升高并恢复正常。由于细胞溶质AR和核AR的这些负变化，再生肝脏的总雄激素结合能力()特别是在DNA合成速率和有丝分裂指数最大的时期（第1天和第2天）。本研究还测量了血清睾酮，因为两种形式AR的丢失表明PH可能导致可用睾酮的减少。血清睾酮含量如所示; 很明显，血清睾酮含量在雄激素的肝总结合能力显著降低期间也显示出显著下降。
雄性大鼠肝部分切除术后肝雄激素受体活性的变化。特定[三H] R1881结合在非手术大鼠（时间0）和部分肝切除大鼠（部分肝切除术后数天）肝脏制备的细胞溶质和核组分中进行了测定。总肝脏含量的值以每克肝脏的雌性激素表示(一)，细胞溶质结合(B类)和核结合(C类). 血清睾酮水平如所示D类.表示为平均值±SD的值以及不同于0时的值：*p<0.005。
由于血清睾酮和肝脏AR含量显著下降，我们对这些动物的肝脏进行了雄激素反应性分析说明了再生对两种肝脏雄激素反应蛋白水平的影响。微粒体酶E2-OHase的活性呈时间依赖性下降()再生过程中。肝切除术后第1天，E2-OHase的活性基本正常，但在第2天急剧下降至正常值的13%，并且在接下来的4天内没有明显上升。第2-6天的酶活性与去势雄性或正常雌性大鼠的酶活性相当(4). 第二种雄激素反应蛋白MEB的水平也在24小时内迅速下降至正常值的15%左右(). 在接下来的5天内，MEB水平逐渐升高，但即使在PH后的第6天也没有达到正常水平。在其他实验中，在手术后24和48小时检查假手术动物的肝脏中的MEB和E2-OHase含量。这两种蛋白质的活性与在时间为0的动物肝脏中观察到的活性相同。
肝部分切除术后两种肝雄激素反应蛋白的活性。微粒体E2-Hase(一)活性被测量为[三H] 形成2-甲氧基-1,3,5（10）-雌三烯-17-酮-3-醇产物和细胞溶质MEB(B类)由其量化[三H] E类2结合活性，如材料和方法中所述。除第2天的MEB测定（由一只大鼠组成）外，所有组均由至少3只动物组成。数值表示为平均值+SEM，与时间0时观察到的数值不同的数值用*p<0.005表示。手术后24小时和48小时对假手术动物进行测试；这些动物的MEB和E2-OHase值与时间0对照组的值相同。
讨论
本文报道的数据显示，在70%肝切除术后的肝脏再生过程中，血清雄激素和雌激素水平发生显著变化，其特异性胞质和核受体的肝脏含量发生变化。这些变化是深刻的，方向相反。从肝切除术后24小时开始，血清睾酮迅速显著下降，并一直保持在很低的水平，直到72小时。巧合的是，由于细胞溶质，尤其是细胞核AR含量的损失，肝脏的总AR含量下降。我们还测量了肝脏中两种雄激素反应蛋白的含量，以关联这些发现。雌激素2-羟化酶是一种微粒体酶，可快速代谢男性肝脏中的雌激素；这种雄激素反应酶在雄性大鼠肝脏中的活性是雌性大鼠肝脏的八倍(4). MEB是一种胞质蛋白，对E具有中等亲和力2对甾体雌激素具有高结合能力和特异性(24)并且具有雄激素反应性，因为在雌性大鼠的肝细胞液中几乎检测不到其活性(4,24). 我们假设MEB可以结合男性肝细胞中的游离雌激素和雌激素代谢产物(1,24); 然而，这种独特蛋白质的生理作用仍然是一个问题。总之，这些蛋白质可以相互补充，促进过量雌激素的快速结合和代谢，这可能会损害雄性大鼠的性完整性。因此，这两种蛋白活性的降低不仅代表雄激素反应性的丧失，而且因为它们代谢或结合雌激素，可能提供了一种细胞内雌激素水平升高的机制。
雄激素反应机制的明显失效，特别是血清睾酮、肝脏AR活性和两种雄激素反应蛋白在肝脏的含量的降低，是显著的，因为这些变化发生在PH后24-48小时内，去势导致的肝功能丧失在8-10天内并不明显(三). 血清雄激素的减少以及肝脏中AR和雄激素依赖蛋白的相应失效可能是由于一种尚未阐明的机制，如睾酮合成减少或代谢增加。另一方面，肝脏雄激素系统衰竭可能是对血清雌激素增加的反应，因此雌激素受体的作用增加，特别是在垂体水平上。对雄性大鼠施用雌激素可导致性二型肝功能女性化（参考文献综述7和8). 这种效应可能是由于垂体生长激素分泌的性二型模式女性化所致，因为生长激素似乎是肝酶和受体性二型的主要决定因素(7,8,31).
PH后血清雄激素水平和AR活性显著下降，但雌激素相关功能增加。肝切除术后24小时血清雌激素水平升高，术后72小时达到最高水平。同样重要的是，ER活性也增加了；ER总含量的增加主要是由于保留在核部分的受体增加。血清E的增加2可能导致现有受体的核移位。然而，肝脏总ER含量的增加可能是E的直接作用诱导新受体合成的结果2或通过刺激垂体对肝脏产生间接作用。也有可能E2可能激活可能存在的任何潜在ER。观察到的受体重新分布在刺激DNA合成的同时开始，并在48小时达到最大值，这一时间与有丝分裂指数的高值一致(23). 这些现象与肝细胞分裂之间的关系也可以通过以下事实得到证明：在PH后72小时，肝细胞内ERs的正常分布重新建立，此时肝细胞内几乎没有核分裂(23). 此外，这些肝受体变异与其他人报告的其他肝再生标志物如DNA聚合酶、蛋白质合成和脱氧胸苷激酶密切相关（参考文献1). 从目前的数据中，我们无法得出肝再生与血清E升高之间的确切因果关系2和ER活性，但数据表明雌激素在再生过程中可能存在重要作用。
鉴于雄激素介导的肝脏反应显著减少，人们不得不怀疑雄激素是否对PH后的再生过程有贡献2在细胞分裂过程中或在肝再生过程中诱导特定蛋白的过程中，水平和核ER活性可能很重要。在这方面，雌激素被认为是许多血清转运蛋白在肝脏合成的诱导剂(32)，这一功能在再生过程中可能至关重要。此外，在再生的增殖期存在大量雌激素效应，这让人想起雌激素促进某些与有丝分裂活性增加相关的肝肿瘤的发展的观察结果(1,21,33).
总之，本文报告的结果表明血清E升高2雄性大鼠的PH值导致某些性二型性肝功能明显女性化。这些发现表明雌激素在再生过程中起着重要作用。在增殖期，观察到血清睾酮减少，肝脏AR和雄激素反应蛋白活性降低，从而得出结论，雄激素在肝再生过程中没有积极作用。
致谢
这项工作得到了退伍军人管理局的部分支持，国家卫生研究院授予了AM30001、AM31577和AM29961，国家咨询委员会授予了84/0058644。
作者感谢Sandra M.Seguiti、Joan E.Willett和John Prelich提供的出色技术援助。
本文中使用的缩写
| 应收账 | 雄激素受体 |
| E类2 | 雌二醇 |
| E2-哈斯 | 雌激素2-羟化酶 |
| 急诊室 | 雌激素受体 |
| [三H] 1881兰特 | 17α-甲基-[三H] 甲基三烯酮 |
| MEB公司 | 男性特异性雌激素粘合剂 |
| 酸碱度 | 肝部分切除术 |
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1Eagon PK、Porter LE、Francavilla A等。肝脏中的雌激素和雄激素受体：它们在肝脏疾病和再生中的作用。塞米恩肝病。1985;5:59–69.[公共医学][谷歌学者] 2Francavilla A，Eagle PK，DiLeo A等。肝胞质和细胞核雌激素和雄激素受体的昼夜节律。胃肠病学。1986;91:182–8. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 三。Eagon PK，Seguiti SM，Willett JE，Rogerson BJ。肝雄激素受体：激素改变的影响（禁欲）肝病学。1985;5:1046. [谷歌学者] 4Turocy JF，Chiang AN，Seeley DH，Eagon PK。H-2拮抗剂对男性肝功能雄激素印迹的影响。内分泌学。1985;117:1953–61.[公共医学][谷歌学者] 5Bannister P，Sheridan P，Losowsky MS。人类肝雄激素受体的鉴定和特征。临床内分泌。1985;23:495–502.[公共医学][谷歌学者] 6Bardin CW，Catteral JS公司。睾酮：生殖器外性二型性的主要决定因素。科学。1981;211:1285–94.[公共医学][谷歌学者] 7Gustafsson JA，Mode A，Norstedt G，et al.下丘脑-垂体-生命轴：控制肝类固醇和药物代谢的新激素系统。生物化学行动激素。1980;7:47–89. [谷歌学者] 8Gustafsson JA，Mode A，Norstedt G，Skett P.性激素诱导的肝酶变化。《生理学年鉴》。1983;45:51–60.[公共医学][谷歌学者] 9希金斯EM，安德森RM。肝脏的实验病理学。I.大白鼠部分手术切除后肝脏的恢复。病理学档案。1931;12:186–202. [谷歌学者] 10Bucher NL、Patel U、Gohen S.与肝再生相关的激素因子。作者：Porter R，Whelan J，编辑。《肝营养因子》，CIBA基金会研讨会，第55期。阿姆斯特丹：爱思唯尔/北荷兰生物医学出版社；1978年，第95–107页。[公共医学][谷歌学者] 11Bucher NLR，Swatfield MN。胰岛素和胰高血糖素协同作用对肝脏再生的调节。美国国家科学院程序。1975;72:1157–60. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 12Caruana JA，Gage AA。肝脏对胰岛素和胰高血糖素的吸收增加，作为再生的信号。妇产外科。1980;150:390–4.[公共医学][谷歌学者] 13.Cohen C.分离一种小鼠颌下腺蛋白，加速新生动物的切牙萌出和眼睑开放。生物化学杂志。1962;237:1555–62.[公共医学][谷歌学者] 14Leffert HL、Koch KS、Moran T、Rubalcava B.大鼠肝脏再生的激素控制。胃肠病学。1979;76:1470–82.[公共医学][谷歌学者] 15Richman RA、Claus TH、Pilkis SJ、Friedman DL。激素刺激成年大鼠肝细胞原代培养中的DNA合成。美国国家科学院程序。1976;73:3589–93. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 16Starzl TE、Francavilla A、Halgrimson CG等。门静脉血中肝营养物质的来源、激素性质和作用。妇产外科。1973;137:179–99. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 17Francavilla A、Porter KA、Benichou J、Jones AF、Starzl TE。犬肝脏再生：形态学和化学变化。外科研究杂志。1978;25:409–19. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 18Rixon RH，Whitfield JF。甲状旁腺激素和钙对肝脏再生的控制。细胞生理学杂志。1976;87:147–56.[公共医学][谷歌学者] 19Canzanelli AF，Rapport D，Guild R.甲状腺对肝脏再生和核酸含量的控制；并观察了嘧啶的作用。美国生理学杂志。1949;157:225–33.[公共医学][谷歌学者] 20Catellano TJ、Schiffman RL、Jacob MC、Loeb JN。糖皮质激素抑制肝细胞增殖：幼鼠正常生长和再生组织的比较。内分泌学。1978;102:1107–12.[公共医学][谷歌学者] 21Mays ET，Christopherson W。性类固醇诱发的肝肿瘤。塞米恩肝病。1984;4:147–57.[公共医学][谷歌学者] 22Porter LE，Elm MS，Van Thiel DH，Eagon PK。人类肝细胞核中的雌激素受体。肝病学。1984;4:1085. [谷歌学者] 23Francavilla A、DiLeo A、Eagon PK等。再生大鼠肝脏：雌激素受体定位与DNA合成之间的关系。胃肠病学。1984;86:552–7. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 24Eagon PK，Fisher SE，Imhoff AF，等。雄性大鼠肝脏雌激素结合蛋白；荷尔蒙变化的影响。Arch Biochem生物物理。1980;201:486–99.[公共医学][谷歌学者] 25Valle BL，Hoch FL。锌，酵母乙醇脱氢酶的一种成分。美国国家科学院程序。1955;41:327–33. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 26.Paul SM、Axelrod J、DiLiberto EJ。脑邻苯二酚雌激素形成酶；细胞色素P450单加氧酶的证明。内分泌学。1977;101:1604–10.[公共医学][谷歌学者] 27Bradford MM。一种利用蛋白质-眼睛结合原理快速灵敏地定量微量蛋白质的方法。分析生物化学。1976;72:248–54.[公共医学][谷歌学者] 28Burton K.用二苯胺测定DNA浓度。方法酶制剂。1968;12:163–6. [谷歌学者] 29Van Thiel DH、Gavaler JS、Cobb CF、Sherins RJ、Lester R.成年雄性大鼠酒精诱导睾丸萎缩。内分泌学。1979;105:888–94.[公共医学][谷歌学者] 30Scatchard G.蛋白质对小分子和离子的吸引力。Ann NY科学院。1949;51:660–72. [谷歌学者] 31Jansson JO、Eden S、Isaksson O。生长激素分泌控制中的性别二型性。Endocr版本。1985;6:128–50.[公共医学][谷歌学者] 32Anderson KE，Kappas A.激素与肝功能。收件人：希夫·E，编辑。肝脏疾病。5.费城：JB Lippincott；1982年，第167–235页。[谷歌学者] 33.Goldfarb S.性激素与肝肿瘤。癌症研究。1976;36:2584–8.[公共医学][谷歌学者] 
